摘要
本研究旨在克隆牦牛(Bos grunniens)水通道蛋白1(Aquaporin-1,AQP1)的基因序列及研究AQP1在不同年龄牦牛睾丸组织中的表达.采集初生(3d)、青年(1岁)、成年(4岁)和老年(8岁)牦牛的睾丸样品,通过RT-PCR技术扩增得到AQP1基因的cDNA全长序列,并对其进行生物信息学分析.采用qRT-PCR、Western blot和免疫组织化学(immunohistochemistry)方法在基因和蛋白水平对其进行检测和定位.qRT-PCR结果显示:随着牦牛年龄的增长,牦牛AQP1基因的表达水平呈先上升后下降的趋势,在青年睾丸中达到最高;在青年组中的表达量与其他组之间差异性均显著(P＜0.05),而中年组与老年组差异不显著(P＞0.05).Western blot结果显示:随着牦牛年龄的增长,AQP1蛋白表达水平也呈现先上升后下降的趋势,在青年睾丸中达到最高;在青年组与其他组中的表达差异性显著(P＜0.05),而初生组,中年组和老年组之间差异性均不显著(P＞0.05).免疫组织化学结果显示:AQP1蛋白在不同年龄牦牛睾丸中均有阳性表达,,主要表达在精子、精子细胞、各级生精细胞、睾丸间质细胞、支持细胞、管周肌样细胞和生精小管基膜中,各年龄表达位置基本一致.本实验结果表明,AQP1在青年组牦牛中的表达显著高于其他组(P＜0.05),推测AQP1在青年牦牛睾丸中发挥着重要作用.本研究为进一步研究AQPs在牦牛睾丸中的作用机制提供理论依据.
基金项目
国家自然科学基金(31972760)
甘肃省教育厅产业支撑引导项目(2019C-03)
甘肃省教育厅创新能力提升项目(2019B-081)
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