摘要
免疫分析测定妊娠相关糖蛋白(pregnancy-associated glycoproteins,PAGs)是目前常用的家畜早 期妊娠检测方法,但是抗体作为识别分子存在制备周期长、成本高等缺点.为丰富奶牛(Bostaurus)早期妊娠诊断技术,降低检测成本,本研究以牛(bovine)妊娠相关糖蛋白(bPAG)的核酸适配体为识别分子,基于双适配体夹心原理,建立了一种bPAG的可视化检测方法,并对适配体浓度、适配体-辣根过氧化物酶浓度、封闭剂浓度、反应时间、包被缓冲液等条件进行了优化.结果显示,在优化条件下,bPAG9在0.5～100 ng/mL浓度范围内呈良好线性(R=0.998),检测限为0.22 ng/mL,目测可视化检测限0.5 ng/mL.采用3个梯度浓度(1,10,100ng/mL)的bPAG9做空白样品添加实验,平均加标回收率为93.2％～105.8％,相对标准偏差为3.51％～7.13％.将建立的方法应用于人工授精30d后的奶牛血清检测,并采用超声波检测法进行对比验证,本方法妊娠诊断准确率达到91.7％.本研究为奶牛早期妊娠诊断提供一种简便、经济、可靠的快速检测新技术.
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