摘要
NAC(NAM/ATAF/CUC)转录因子是植物中特有且最大的转录因子家族之一,在抵抗逆境胁迫反应、调控植物生长发育、参与器官模式建成以及生长素传导、叶片凋亡等生理过程中具有重要作用.为了鉴定大白菜(Brassica campestris ssp.pekinensis)—结球甘蓝(B.oleracea var.capitata)双单倍体(double haploid,DH)易位系AT1-18中的外源甘蓝NAC086基因,同时了解该基因的功能,以AT1-18及其亲本为研究对象,通过特异性引物设计、PCR扩增片段序列分析、逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)、实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)等方法,对大白菜和结球甘蓝NAC086基因进行了鉴定,同时对NAC086基因的组织表达特异性、响应外源生长素或盐水处理后的表达模式进行了研究.结果表明,基于大白菜Bra006392设计的特异性引物仅在大白菜中具有扩增产物,基于结球甘蓝基因Bol034440设计的特异性引物同时在结球甘蓝和易位系中具有扩增产物,且在易位系中扩增产物的序列和Bol034440基因CDS序列的一致性高达99％,证明了在易位系中结球甘蓝的Bol034440基因代换了大白菜的Bra006392基因.RT-PCR分析表明,Bol034440在大白菜不同组织中几乎无表达,在易位系不同组织中具有较高的表达量(依次是根>叶>蕾>花>茎,其中根与花,蕾,茎差异显著).Bra006392在易位系中除在根中有少量表达外,其他组织几乎无表达;在大白菜叶中表达量显著高于其他组织.Bra008567在大白菜和易位系不同组织中均具有一定表达量,其中在大白菜的根中表达量最高,显著高于其他组织;在易位系的叶中表达量最高,除与根差异不显著,与其他组织均达到显著差异.qRT-PCR分析表明Bol034440和Bra008567基因负向响应外源生长素处理作用,正向响应盐水处理的作用,响应时间均在处理后2 h,其中Bol034440在响应过程中占主导地位.研究结果为开展NAC086基因的功能验证和研究外源甘蓝NAC086基因在大白菜遗传背景下的互作与调控提供了依据.
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