摘要
本研究旨在探索肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)在奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,bMECs)中的表达定位及RAS对损伤的调节作用.用不同浓度脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理bMECs后,CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测细胞活性,qPCR检测IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、ACE2、ACE、MasR和AT1R基因表达水平,酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测上清中AngⅡ和Ang 1-7含量;采用Western blot和细胞免疫荧光测定ACE2蛋白在bMECs中的表达和位置.实验结果表明,ACE2在bMECs中有表达,且定位于胞膜和胞浆;LPS处理bMECs 24 h后产生明显炎性损伤,IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、ACE、AT1R基因和AngⅡ蛋白的表达随LPS浓度升高而增加,ACE2和MasR基因的表达随LPS浓度增加而先升高后降低,Ang 1-7蛋白的表达随LPS浓度增加而下降.本研究表明bMECs中存在ACE2、ACE、MasR、AT1R、AngⅡ和Ang1-7等RAS成员,且ACE2/MasR/Ang 1-7和ACE/AngⅡ/AT1R通路参与了LPS诱导的bMECs炎性损伤调控.本实验为研究RAS在乳腺炎中的调控作用及发掘抗炎药物作用新靶点奠定了基础.
基金项目
宁夏回族自治区自然科学基金(2020AAC03074)
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