摘要
雌二醇(estradiol,E2)对颗粒细胞的生长发育起着重要的调控作用,为探究不同浓度雌二醇对鹅(Anser cygnoides domestica)等级卵泡颗粒细胞(hierarchical follicle granulosa cells,HFGCs)的影响及其效应,本研究将'天府'肉鹅母系母鹅等级卵泡颗粒细胞随机分为实验组(E5,E7,E9)和对照组(NC),使用不同浓度(1×10-5,1×10-7和1×10-9 mol/L)雌二醇处理实验组颗粒细胞.处理结束后,收集样品分别用于MTT法检测细胞活性、油红O染色检测细胞脂质沉积和转录组测序分析.MTT结果显示,实验组的细胞活性均显著高于对照组(P<0.05);油红O染色结果显示,随着E2浓度的降低,颗粒细胞脂质沉积减少,E2浓度为1×10-9 mol/L时差异显著(P<0.05);转录组测序分析结果显示,E5、E7、E9与NC比较,在差异倍数(fold change,FC)>1.2或<0.83且P<0.05的条件下,分别筛选到267、79、162个差异表达基因;KEGG富集分析结果显示,差异表达基因分别显著富集于鞘脂代谢、胰岛素信号和Wnt信号、ABC转运蛋白等通路中.鞘脂代谢通路中的3-酮二氢鞘氨醇还原酶(3-ketodihydrosphingosine reductase,KDSR)、神经酰胺合酶6(ceramide synthase 6,CERS6)及神经酰胺合酶4(ceramide synthase 4,CERS4),胰岛素和Wnt信号通路中丝裂原活化蛋白激酶8(mitogen-activated protein kinase 8,MAPK8)、肌醇多磷酸磷酸酶样1(inositol polyphosphate phosphatase like 1,INPPL1)及硬骨素(sclerostin,SOST)均参与调控颗粒细胞活性;鞘脂代谢及ABC转运蛋白通路中的半乳糖-3-O-硫转移酶1(galactose-3-O-sulfotransferase 1,GAL3ST1)、鞘氨醇-1-磷酸裂解酶1(sphingosine-1-phosphate lyase 1,SGPL1)、ATP结合盒亚家族A成员2(ATP binding cassette subfamily A member 2,ABCA2)及ATP结合盒亚家族A成员5(ATP binding cassette subfamily A member 5,ABCA5)在E2浓度为1×10-9 mol/L时参与调控颗粒细胞脂质沉积.研究结果表明,外源E2处理通过影响鞘脂代谢、胰岛素信号、Wnt信号及ABC转运蛋白通路中相关基因的表达水平提高了鹅等级卵泡颗粒细胞活性并抑制了脂质沉积,此结果为探究雌二醇调控鹅卵泡颗粒细胞生长发育的分子机制研究提供了基础资料.
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