摘要
滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)是一种重要的禽类致病性支原体,感染鸡(Gallus domesticus)和火鸡(Meleagris gallopavo)后引起渗出性滑膜炎、关节炎、跗跖部肿胀和呼吸道炎,造成养鸡业的重大经济损失.亚甲基四氢叶酸脱氢酶(methylenetetrahydrofolate dehydrogenase,MTHFD)催化5,10-亚甲基四氢叶酸生成5,10-甲炔基四氢叶酸,该酶是叶酸代谢中的关键酶,参与嘌呤核苷酸的合成.为研究滑液支原体MTHFD蛋白的免疫原性及其在MS中的分布,本研究参照GenBank中MS WVU1853株双功能5,10-亚甲基四氢叶酸脱氢酶/5,10-亚甲基四氢叶酸环化水解酶(bifunctional 5,10-methylenetetrahydrofolate dehydrogenase/5,10-methenyltetrahydrofolate cyclohydrolase,folD)基因序列设计引物,利用PCR扩增MS folD基因并对其序列进行分析和优化.结果表明,MS folD基因全长837 bp,与GenBank中其他MS菌株folD基因的序列相似性达99.6％.folD基因克隆至pET-28a(+)质粒后转化至大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞,诱导后SDS-PAGE检测表达情况.结果显示重组蛋白(recombinant protein,r)MS MTHFD成功表达,且相对分子质量约为36 kD.纯化蛋白免疫新西兰兔(Oryctolagus cuniculus)制备抗血清,并利用Western blot、ELISA与免疫荧光试验对rMS MTHFD的免疫原性和MTHFD在MS中的分布进行分析.结果表明,rMS MTHFD蛋白具有良好的免疫原性,MTHFD在MS的细胞膜和细胞浆中均有分布,但在胞浆中的含量较多.本研究结果为滑液支原体MTHFD生物学功能的深入研究提供了基础资料.
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