摘要
γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)是一种Ⅱ型干扰素,可以抵抗病毒在机体的感染复制,在畜禽养殖业中具有潜在应用价值,目前关于山羊(Capra hircus)γ-干扰素(goat interferon-γ,CapIFN-γ)的真核表达少有报道.本研究旨在对酵母(Saccharomyces)表面展示系统进行富硒改造,并构建表面展示CapIFN-γ的重组富硒酵母,同时对其进行活性分析.依据酿酒酵母(S.cerevisiae)EBY100生长曲线及富硒特性,筛选亚硒酸钠的最适浓度,对酿酒酵母进行富硒改造.人工合成编码山羊γ-干扰素的成熟肽基因,构建重组质粒pYD1-CapIFN-γ,电击转化富硒酵母,将鉴定正确的重组菌株接种于含2％半乳糖的YNB-CAA液体培养基中诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot和间接免疫荧光实验(indirect immunofluorescence assay,IFA)分析,同时,利用细胞病变抑制法分析重组山羊γ-干扰素对羊痘病毒(Goatpox virus,GPV)增殖的影响.结果显示,亚硒酸钠最适终浓度为60μg/mL.SDS-PAGE和Western blot鉴定均显示在约25 kD位置出现目的蛋白条带,IFA鉴定显示重组富硒酵母出现绿色荧光信号,且重组蛋白能够抑制羊痘病毒在羊肾细胞中的增殖.本研究成功对酵母表面展示系统进行了富硒改造,并获得了CapIFN-γ重组富硒酵母,为山羊γ-干扰素抗病毒作用的深入研究及新型酵母饲料添加剂的开发提供参考,也为山羊绿色健康养殖及疫病防控提供技术保障.
基金项目
重庆市自然科学基金面上项目(cstc2019jcyj-msxmX0512)
重庆荣昌农牧高新技术产业研发专项(cstc2019ngzx0012)
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