农业生物技术学报2022，Vol.30Issue(4) ：686-694.DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2022.04.007

端粒逆转录酶基因(TERT)修饰对蒙古羊输卵管上皮细胞体外增殖能力的影响

Effect of Telomerase Reverse Transcriptase Gene (TERT) Modification on Proliferation of Mongolian Sheep (Ovis aries) Oviduct Epithelial Cells In vitro

刘洋 海勒思 刘永斌 刘春霞 曹俊伟 张焱如
农业生物技术学报2022，Vol.30Issue(4) ：686-694.DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2022.04.007
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端粒逆转录酶基因(TERT)修饰对蒙古羊输卵管上皮细胞体外增殖能力的影响

Effect of Telomerase Reverse Transcriptase Gene (TERT) Modification on Proliferation of Mongolian Sheep (Ovis aries) Oviduct Epithelial Cells In vitro

刘洋 1海勒思 1刘永斌 2刘春霞 1曹俊伟 1张焱如1
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作者信息

  • 1. 内蒙古农业大学生命科学学院,呼和浩特010018;内蒙古自治区生物制造重点实验室,呼和浩特010018
  • 2. 内蒙古自治区农牧业科学院,呼和浩特010031
  • 折叠

摘要

输卵管上皮细胞(oviduct epithelial cells,OECs)能够提供理想的生理生化环境、支持胚胎发育,但其体外增殖能力较弱,无法满足实验研究与应用需求.本研究将外源性端粒逆转录酶基因(telomerase reverse transcriptase,TERT)转入蒙古羊(Ovis aries)输卵管上皮细胞(sheep OCEs,SOECs)并观察TERT基因修饰的蒙古羊输卵管上皮细胞(TERT-SOECs)的体外增殖能力.首先经酶消化法建立了SOECs系,将重组质粒pCI-neo-TERT以脂质体法转染至原代SOECs;经G418抗性筛选,得到稳定表达TERT基因的SOECs,qPCR检测了TERT基因在细胞中的表达;免疫荧光法检测上皮细胞特异性标志物角蛋白18(cytokeratin18,CK18)并对TERT-SOECs进行生长曲线拟合和活性测定.结果显示,成功将TERT基因导入了SOECs,PCR检测表明细胞表达了276 bp的TERT基因片段,TERT基因表达量极显著高于未转染和转染pCI-neo空载体的SOECs(P<0.001);转染后的细胞仍保留了SOECs的生物学特性,P5 TERT-SOECs倍增时间为46.61 h,而P5 SEOCs倍增时间为65.03 h,TERT-SOECs体外增殖速度明显高于SOECs.综上,本研究成功建立了有较强体外增殖能力的TERT-SOECs系,为种质资源细胞库提供了种子细胞.

关键词

端粒逆转录酶(TERT)/蒙古羊输卵管上皮细胞(SOECs)/体外增殖/脂质体法

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基金项目

内蒙古自治区科技重大专项(2020ZD0003)

出版年

2022
农业生物技术学报
中国农业大学 中国农业生物技术学会

农业生物技术学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.801
ISSN：1674-7968
参考文献量6
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