摘要
长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)是一类长度大于200个核苷酸且不能编码蛋白质的RNA,可通过多种调控途径作用于皮肤恶性黑色素瘤的增殖、侵袭和转移等.为探究酉州乌羊(Capra hircus)LncRNA TCONS_00153149基因在黑色素沉积过程的调控作用及分子机制,本研究以酉州乌羊和渝东白山羊为对象,验证LncRNA TCONS_00153149在不同肤色山羊组织的表达特性,同时分析其在小鼠(Mus musculus)B16-F10黑色素细胞分化阶段的表达特征,通过构建LncRNA TCONS_00153149的慢病毒表达载体,转染B16-F10黑色素细胞,探究LncRNA TCONS_00153149对黑色素沉积的调控作用.结果显示LncRNA TCONS_00153149在酉州乌羊和渝东白山羊不同组织中均有不同程度的表达,且酉州乌羊皮肤组织中的相对表达量极显著高于渝东白山羊(P<0.01);LncRNA TCONS_00153149的表达在黑色素细胞分化前期呈上升趋势,分化第3天相对表达量达到最高,其后呈递减趋势,在分化第7天达到最低,其在第3天的相对表达量极显著高于分化第0、1和7天(P<0.01);转染B16-F10细胞发现,与转空载体组(negative control group,NC)相比,转染LncRNA TCONS_00153149基因的黑色素细胞中,LncRNA TCONS_00153149基因相对表达量极显著提高(P<0.01),黑色素含量显著升高,这些结果验证了LncRNA TCONS_00153149基因对黑色素沉积的显著促进作用.同时,黑色素沉积相关基因酪氨酸酶相关蛋白1(TYRosinase related protein 1,TYRP1)、小眼畸形转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)、酪氨酸酶相关蛋白2基因(TYRosinase-related protein 2,TYRP2)相对表达量显著升高(P<0.05),Agouti信号蛋白(agouti signaling protein,ASIP)相对表达量极显著降低(P<0.01).结合Inta RNA2.0.0软件分析LncRNA TCONS_00153149与色素关键基因的互作结果,本研究推测LncRNA TCONS_00153149基因可能是通过靶向增强黑色素候选基因(TYRP1,TYRP2,MITF,ASIP基因等)的功能,正向调控黑色素的沉积.本研究为明确山羊皮肤着色相关的LncRNA调控理论的研究提供了基础资料.
基金项目
国家自然科学基金(32002206)
重庆市自然科学基金重点研发项目(Cstc2020jcyj-zdxmX0005)
重庆市市级财政资金项目(01010106)
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