摘要
斑点型锌指结构蛋白(speckle-type POZ(pox virus and zinc finger protein)protein,SPOP)是E3泛素连接酶Cullin 3家族中的一员,通过与底物蛋白的互作促进底物的泛素化和降解,从而影响底物蛋白的生物学功能.本研究构建了鸡(Gallus gallus)SPOP基因的重组真核表达载体pCMV-HA-SPOP,并将其和空载体pCMV-HA分别转染鸡胚成纤维细胞系(DF-1),提取细胞总蛋白,利用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)联合质谱分析技术筛选和鉴定与鸡SPOP蛋白互作的细胞蛋白,并对其进行基因本体(Gene Ontology,GO)功能注释、KEGG信号通路和蛋白互作网络分析.进一步利用荧光共定位和Co-IP实验,对鸡SPOP蛋白和筛选的细胞蛋白26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基11(26S proteasome non ATPase regulatory subunit 11,PSMD11)进行相互作用验证.结果显示,重组蛋白HA-SPOP在细胞内得到正确表达,并且主要定位在细胞核和细胞质.利用Co-IP联合质谱分析技术共筛选到158个与鸡SPOP蛋白相互作用的细胞蛋白,主要分布在细胞核、细胞骨架和细胞质,参与了酶活性、核酸结合和蛋白质加工等生物学过程及代谢、核糖体组成和生物调节等信号通路.蛋白互作网络图分析发现,与鸡SPOP蛋白互作的细胞蛋白之间存在复杂的相互作用网络,其中蛋白酶体激活物复合物亚单位3(proteasome activator complex subunit 3,PSME3)、PSMD11和H2A组蛋白家族成员Z(H2A histone family,member Z,H2AFZ)3个蛋白可能与鸡SPOP蛋白具有直接的相互作用.荧光共定位和Co-IP实验结果表明,鸡SPOP蛋白与PSMD11蛋白存在相互作用,并且可以改变PMSD11蛋白的细胞内定位.本研究为进一步探究鸡SPOP蛋白在细胞内的生物学功能提供参考.
基金项目
国家自然科学基金(31960698)
国家自然科学基金(31760732)
国家自然科学基金(31502074)
贵州省科技计划(黔科合基础[2020]1Y134号)
贵州省地方家禽产业联合攻关项目(黔财农[2020]175号)
国家科技期刊平台
NSTL
维普
万方数据