农业生物技术学报2022，Vol.30Issue(5) ：957-965.DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2022.05.013

鸭IFNα-AvBD2融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达及生物学活性检测

Secretory Expression and Bioactivity Detection of Duck (Anas platyrhynchos) IFNα-AvBD2 Fusion Protein in Pichia pastoris

豆子航 李秀丽 庞洪泽 韩颖 雷白时 赵款 庞敬红 袁万哲
农业生物技术学报2022，Vol.30Issue(5) ：957-965.DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2022.05.013
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鸭IFNα-AvBD2融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达及生物学活性检测

Secretory Expression and Bioactivity Detection of Duck (Anas platyrhynchos) IFNα-AvBD2 Fusion Protein in Pichia pastoris

豆子航 1李秀丽 1庞洪泽 1韩颖 1雷白时 2赵款 2庞敬红 3袁万哲2
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作者信息

  • 1. 河北农业大学动物医学院,保定071001
  • 2. 河北农业大学动物医学院,保定071001;河北省兽医生物技术创新中心,保定071001
  • 3. 河北伯瑞动物药业有限公司,石家庄050800
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摘要

鸭(Anas platyrhynchos)α干扰素(interferonα,IFNα)具有广谱的抗病毒活性,禽β防御素2(avianβ-defensin 2,AvBD2)具有广谱的抗菌活性.本研究利用毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌表达鸭IFNα-AvBD2融合蛋白并明确IFNα-AvBD2的生物学活性,对于现有无抗养殖条件下的鸭疫病防控具有重要意义.本课题组在前期工作中已成功构建了原核表达质粒pET32a-AplIFNα-AvBD2,并在大肠杆菌(Escherichia coli)中成功表达.本研究以实验室保存的pET32a-AplIFNα-AvBD2为模板,通过PCR方法扩增得到AplIFNα-AvBD2成熟蛋白的基因片段,构建重组质粒pPICZαA-AplIFNα-AvBD2;将线性化的重组质粒电转化至毕赤酵母KM71H感受态细胞,阳性重组菌经甲醇诱导表达,对表达产物进行体外生物学活性研究.SDS-PAGE和Western blot结果显示,AplIFNα-AvBD2重组蛋白分子量约为24 kD;琼脂扩散法和微量稀释法表明重组蛋白对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和大肠杆菌有较强的抗菌活性;细胞病变抑制法检测重组蛋白抗病毒活性为1.2×105 U/mL,比活性为5.2×105 U/mg;MTT细胞毒性试验显示重组蛋白对非洲绿猴肾细胞(Vero)无毒.上述结果说明,AplIFNα-AvBD2可在毕赤酵母中分泌表达,同时具有抗菌活性和抗病毒活性.本研究为AplIFNα-AvBD2的进一步应用提供了基础资料.

关键词

α干扰素(IFNα)/β防御素2(AvBD2)/毕赤酵母/融合蛋白/抗菌活性/抗病毒活性

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基金项目

2020年度石家庄市重点研发项目(201208)

出版年

2022
农业生物技术学报
中国农业大学 中国农业生物技术学会

农业生物技术学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.801
ISSN：1674-7968
参考文献量7
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