摘要
肌醇1,4,5-三磷酸受体2型(inositol 1,4,5-triphosphate receptor type 2,IP3R2)是位于内质网的细胞内Ca2+释放通道,通过调控Ca2+释放而影响蛋壳品质.为阐明IP3R2蛋白结构域对鸭(Anas platyrhyncha domestica)子宫内膜上皮细胞Ca2+分泌的调控效应及其对钙转运相关基因的影响,本研究以蛋鸭品种三穗鸭为研究对象,构建IP3R2蛋白结构域的表达载体pCDNA3.1-IP3R2,转染至鸭子宫内膜上皮细胞,以Flag标签ELISA检测试剂盒确定IP3R2蛋白结构域的表达量;以Fluo-3/AM钙离子荧光标记检测胞内Ca2+含量;以qPCR检测不同结构域过表达量及离子转运相关基因的mRNA水平.结果显示,MIR、RYDR_ITPR(1)、RYDR_ITPR(2)、RIH_assoc和Ion_trans结构域过表达均引起鸭子宫内膜上皮细胞内Ca2+浓度下降;RYDR_ITPR(1)和IP3R2-Ion_trans的表达量与胞内Ca2+浓度显著负相关(P<0.05);RYDR_ITPR(2)、RIH_assoc和5个结构域共转染的表达量与胞内Ca2+浓度极显著负相关(P<0.01);RYDR_ITPR(2)结构域表达量与RYR2、KCNJ15和CA2基因表达量呈显著正相关(P<0.05);MIR结构域过表达量与IP3R1、CALB1和CA2的基因表达量呈现显著正相关(P<0.05),2个RYDR_ITPR结构域过表达量均与KCNJ15和RYR2基因表达量呈显著正相关(P<0.05);RIH_assoc结构域过表达量与IP3R2和ORAI1基因表达量呈显著正相关(P<0.05);Ion_trans结构域过表达量与CALB1、SLC8A1和CA2基因表达量呈显著正相关(P<0.05);5个结构域共转染后的表达量与CFTR基因表达量呈显著正相关、与TRPV6呈显著负相关(P<0.05).上述结果提示,5个IP3R2蛋白结构域的过表达可能引起鸭子宫内膜上皮细胞内Ca2+向胞外释放,对细胞中20个离子转运基因表达水平的调控效应存在差异.本研究可为分子遗传标记选择和鸭蛋壳品质提高提供参考依据.
基金项目
国家自然科学基金(31760663)
贵州省科技人才补助项目(5788)
贵州省千层次创新人才项目(贵大千层次[2015]01)
万方数据