摘要
粉红聚端孢(Trichothecium roseum)是一种重要的菌寄生真菌,能够通过菌寄生作用抑制病原微生物的生长,可以有效防治多种植物病原真菌.几丁质酶(chitinase,chi)在粉红聚端孢寄生和抑菌过程中发挥重要作用,本研究旨在实现粉红聚端孢几丁质酶Trchi2基因在毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达,并明确其酶学性质,采用逆转录PCR(reverse transcriptase PCR,RT-PCR)克隆粉红聚端孢几丁质酶Trchi2基因,构建毕赤酵母重组表达载体,转入毕赤酵母GS115,筛选获得的酵母转化子通过甲醇诱导表达,获得Trchi2蛋白,测定其几丁质酶活性并进行酶学性质的研究.本研究成功构建了毕赤酵母重组表达载体pPIC9K-Trchi2,获得了分泌表达几丁质酶Trchi2的工程菌GS115-Trchi2-2-8;诱导培养7 d产酶量最高,酶活力达3.96 U/mL,表达的几丁质酶Trchi2表观分子量为50 kD,酶解胶体几丁质的产物为几丁二糖;在45℃、pH 6.0时酶活性最高,在pH 4～7.5、30～55℃条件下相对稳定;当催化反应体系中存在50 mmol/L的Ag+、Hg2+、Cu2+、Fe2+时,Trchi2酶活性受到强烈抑制.本研究对几丁质酶Trchi2的基本性质进行了研究,为其结构功能的深入发掘和生产应用提供了理论依据.
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