摘要
枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)因其安全性和良好的异源蛋白表达特性,被广泛应用于食品工业、饲料发酵及生物工程等行业,尤其以模式菌枯草芽胞杆菌168为宿主菌进行基因工程改造的研究越来越多.但是,来自自然环境的野生型枯草芽胞杆菌由于转化效率极低,其基因工程改造受到了很大程度的限制.本研究通过双交叉同源重组方法,将源自枯草芽胞杆菌168的感受态转录因子(competence transcription factor,comK)基因融合木糖启动子PxylA,并插入至野生型枯草芽胞杆菌C6(BS-C6)的胞外丝氨酸蛋白酶(extracellular serine protease,epr)基因位点,成功获得野生型枯草芽胞杆菌超级感受态菌株C6-comks.结果表明,超级感受态C6-comks的质粒转化效率可达到(4117±363)CFU/μg,相对BS-C6提高了8倍(P<0.01),转化PCR纯化产物效率可达到(442±52)CFU/μg,超过BS-C6转化效率的73.7倍(P<0.01).同时,荧光定量结果表明,C6-comks中感受态形成关键基因comK、comGB、comGF、comFA和comFC的基因表达量相对BS-C6分别极显著升高了77、1654、1180、885和108倍(P<0.01).本研究成功构建了野生型枯草芽胞杆菌超级感受态菌株,并分析了感受态转化效率产生差异的原因,为基于野生型枯草芽胞杆菌作为表达宿主的基因工程应用提供了良好的借鉴.
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