农业生物技术学报2022，Vol.30Issue(8) ：1632-1639.DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2022.08.018

奶牛妊娠相关糖蛋白PAG6多克隆抗体的制备及鉴定

Preparation and Identification of Polyclonal Antibody Against Bovine (Bos taurus) Pregnancy-associated Glycoprotein PAG6

李志明 袁梦仪 许海涛 蔡德霖 王相国 肖龙菲 安红 王颖秋 王骞 郭勇 齐晓龙 倪和民
农业生物技术学报2022，Vol.30Issue(8) ：1632-1639.DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2022.08.018
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奶牛妊娠相关糖蛋白PAG6多克隆抗体的制备及鉴定

Preparation and Identification of Polyclonal Antibody Against Bovine (Bos taurus) Pregnancy-associated Glycoprotein PAG6

李志明 1袁梦仪 2许海涛 3蔡德霖 1王相国 1肖龙菲 1安红 1王颖秋 1王骞 1郭勇 1齐晓龙 1倪和民1
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作者信息

  • 1. 北京农学院动物科学技术学院,北京102206
  • 2. 北京市昌平区动物疫病预防控制中心,北京102299
  • 3. 全国畜牧总站,北京100125
  • 折叠

摘要

基于抗原抗体反应检测奶牛(Bos taurus)血液中妊娠相关糖蛋白(pregnancy-associated glycoproteins,PAGs)是目前世界上应用最普遍的牛早孕检测技术,以boPAG6作为标志物应用于母牛早期妊娠诊断的准确性更高,因此制备高敏感性的boPAG6多克隆抗体,能为奶牛早期妊娠诊断试剂盒的研发提供支持.本研究利用PCR技术扩增荷斯坦奶牛boPAG6(GenBank No.NM_176617.2)基因,构建重组质粒pET30a-boPAG6;在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中表达His-boPAG6蛋白并优化,以重组蛋白His-boPAG6作为免疫原免疫BALB/c小鼠(Mus musculus)制备多克隆抗体,用ELISA方法检测血清效价,Western blot方法检测纯化后的抗体分别与重组蛋白His-boPAG6和奶牛血清的特异性反应,利用免疫荧光技术定位boPAG6在原代滋养层细胞中的表达.结果显示,本研究成功构建出大小为6534 bp的重组质粒pET30a-boPAG6,并在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)终浓度为0.5 mmol/L、诱导时间为8 h的条件下表达的His-boPAG6量最高,其蛋白分子质量为50 kD.以纯化后浓度为0.412 mg/mL的His-boPAG6蛋白免疫,ELISA中抗血清的效价为1:102400,多克隆抗体能特异性识别His-boPAG6抗原并有效区分妊娠和未妊娠奶牛血清,还可检测到原代滋养层细胞中存在boPAG6蛋白.本研究成功制备了boPAG6多克隆抗体,为奶牛早期妊娠ELISA检测系统的开发提供了理论支持.

关键词

奶牛/妊娠相关糖蛋白6(PAG6)/原核表达/多克隆抗体

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基金项目

出版年

2022
农业生物技术学报
中国农业大学 中国农业生物技术学会

农业生物技术学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.801
ISSN：1674-7968
参考文献量7
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