农业生物技术学报2022，Vol.30Issue(8) ：1640-1648.DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2022.08.019

黄瓜绿斑驳花叶病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光RT-PCR检测方法的建立

Development of SYBR GreenⅠReal-time RT-PCR for the Detection of Cucumber green mottle mosaic virus

田沂民 吴建祥 陈磊 罗金燕 滕凯 叶军 杜伟 于翠
农业生物技术学报2022，Vol.30Issue(8) ：1640-1648.DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2022.08.019
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黄瓜绿斑驳花叶病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光RT-PCR检测方法的建立

Development of SYBR GreenⅠReal-time RT-PCR for the Detection of Cucumber green mottle mosaic virus

田沂民 1吴建祥 2陈磊 3罗金燕 3滕凯 4叶军 1杜伟 5于翠1
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作者信息

  • 1. 上海海关动植物与食品检验检疫技术中心,上海200135
  • 2. 浙江大学农业与生物技术学院,杭州310058
  • 3. 上海农业技术推广服务中心,上海201103
  • 4. 上海海关动植物检疫监管处,上海200082
  • 5. 宁夏回族自治区农业技术推广总站,银川750001
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摘要

黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是我国重要的检疫性植物种传病毒,在世界各地均有发生,造成西瓜(Citrullus lanatus)、黄瓜(Cucumis sativus)、甜瓜(Cucumis melo)等作物的严重经济损失.CGMMV可由种子直接传播至下一代秧苗,为保障种子贸易顺利进行,有必要建立快速而准确的病毒检测方法.本研究以截获的带毒种子为材料,针对CGMMV建立了SYBR GreenⅠ实时荧光RT-PCR检测方法,其中设计筛选特异、灵敏的引物是关键.利用多次筛选得到的引物对建立了SYBR GreenⅠ实时荧光RT-PCR检测方法,实验结果表明该方法能够特异地检测CGMMV,不与其他侵染葫芦科植物的病毒发生交叉反应;灵敏度是RT-PCR方法的1000倍,是TaqMan探针实时荧光RT-PCR方法的100倍;且整个检测过程可在2.5 h内完成,是一种快速、灵敏、可靠的检测方法;应用该方法及TaqMan实时荧光RT-PCR方法同时对国内外198份种苗样品进行检测,结果显示kappa值大于0.82,说明两种方法具有高度一致性,本研究建立的SYBR GreenⅠ实时荧光RT-PCR方法有效、可靠,为种子快速通关提供新的技术手段.

关键词

黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)/SYBR/Green/Ⅰ实时荧光RT-PCR/种子/灵敏度/特异性

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基金项目

出版年

2022
农业生物技术学报
中国农业大学 中国农业生物技术学会

农业生物技术学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.801
ISSN：1674-7968
被引量1
参考文献量14
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