农业生物技术学报2022，Vol.30Issue(9) ：1797-1809.DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2022.09.013

GST-pull Down和免疫共沉淀联合质谱鉴定埃及伊蚊中肠的Cry4Ba和Cry11Aa互作蛋白

Identification of Cry4Ba and Cry11Aa Interacting Proteins in Aedes aegypti Midgut by GST-pull Down and Co-immunoprecipitation Combined with Mass Spectrometry

王焌翔 杨小祯 何欢 张灵玲 关雄
农业生物技术学报2022，Vol.30Issue(9) ：1797-1809.DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2022.09.013
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GST-pull Down和免疫共沉淀联合质谱鉴定埃及伊蚊中肠的Cry4Ba和Cry11Aa互作蛋白

Identification of Cry4Ba and Cry11Aa Interacting Proteins in Aedes aegypti Midgut by GST-pull Down and Co-immunoprecipitation Combined with Mass Spectrometry

王焌翔 1杨小祯 1何欢 1张灵玲 1关雄1
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作者信息

  • 1. 福建农林大学植物保护学院/生物农药与化学生物学教育部重点实验室/海峡两岸特色作物安全生产省部共建协同创新中心,福州350002
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摘要

晶体蛋白(crystal protein,Cry)毒素是苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)分泌的主要杀虫蛋白,其中Cry4Ba和Cry11Aa对埃及伊蚊(Aedes aegypti)幼虫具有特异的毒杀活性.Cry毒素作用于昆虫肠道上皮细胞需要细胞膜受体的介导,而昆虫肠道的免疫应答因子通过识别Cry毒素,进而驱动免疫系统抵御毒素的侵染.为了系统探究Cry4Ba和Cry11Aa毒素与埃及伊蚊的分子互作机制,本研究通过制备GST-Cry4Ba和GST-Cry11Aa融合蛋白,提取Cry4Ba和Cry11Aa晶体蛋白,利用GST-pull down和免疫共沉淀技术挖掘埃及伊蚊中肠刷状缘膜泡囊蛋白中与Cry4Ba和Cry11Aa互作的结合蛋白.通过液相色谱串联质谱鉴定和数据库比对,发现133个与Cry4Ba互作蛋白和237个与Cry11Aa互作蛋白.通过生物信息学分析,从中筛选到16个膜结合或跨膜蛋白,包括5个氨肽酶N、1个碱性磷酸酶、1个钙黏蛋白、2个α-淀粉酶、1个B型清道夫受体、2个电压依赖性阴离子通道以及4个肌动蛋白.此外,筛选到7个与免疫或维持细胞稳态相关蛋白,包括1个肽聚糖识别蛋白、1个载脂蛋白、1个血粘蛋白、1个丝氨酸蛋白酶抑制剂以及3个热激蛋白.本研究为后续埃及伊蚊Bt受体的功能验证以及免疫应答机制的研究提供必要的靶标参考.

关键词

苏云金芽胞杆菌/埃及伊蚊/GST-pull/down/免疫共沉淀/Cry互作蛋白

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基金项目

出版年

2022
农业生物技术学报
中国农业大学 中国农业生物技术学会

农业生物技术学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.801
ISSN：1674-7968
参考文献量1
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