农业生物技术学报2022，Vol.30Issue(10) ：1884-1893.DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2022.10.003

牛恒定链与BoLAⅡ类分子β链活性片段的结合与定位分析

Binding and Localization Analysis Between Bovine (Bos taurus) Invariant Chain and the Active Fragment of BoLA Class Ⅱ Molecule β Chain

陈芳芳 于凤梅 张俊 谈阳 刘翠艳 桂亚萍
农业生物技术学报2022，Vol.30Issue(10) ：1884-1893.DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2022.10.003
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牛恒定链与BoLAⅡ类分子β链活性片段的结合与定位分析

Binding and Localization Analysis Between Bovine (Bos taurus) Invariant Chain and the Active Fragment of BoLA Class Ⅱ Molecule β Chain

陈芳芳 1于凤梅 1张俊 1谈阳 1刘翠艳 1桂亚萍1
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作者信息

  • 1. 安徽农业大学动物科技学院/安徽省人畜共患病实验室,合肥230036
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摘要

牛白细胞抗原(bovine leukocyte antigen,BoLA),又名主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC),其Ⅱ类分子及其伴侣蛋白恒定链(invariant chain,Ii)在加工和递呈抗原肽中起关键作用.为了解在此过程中BoLAⅡβ链与Ii结合和在细胞内定位的特征,本研究提取了淮北黄牛(Bos taurus)血细胞mRNA并反转录为cDNA,应用PCR技术扩增牛Ii与BoLAⅡβ链及结构域的基因片段,并分别构建相应的真核和原核表达质粒.利用原核表达系统进行蛋白的表达和纯化,应用拉下法和Western blot检测Ii结合BoLAⅡβ及其片段的结合关系.应用激光共聚焦显微镜观察Ii与BoLAⅡβ链及其片段在细胞内共定位.结果显示,构建的含牛Ii、BoLAⅡβ、BoLAⅡβ(β1β2)和BoLAⅡβ(TC)基因的重组质粒转化细菌,经诱导能正确表达蛋白并得到纯化.BoLAⅡβ和BoLAⅡβ(β1β2)具有结合Ii的活性功能,而BoLAⅡβ(TC)却无此功能.同时,在真核细胞内Ii能与BoLAⅡβ及其主要结构域BoLAⅡβ(β1β2)和BoLAⅡβ(TC)共定位.综上所述,BoLAⅡβ的β1β2是结合Ii的关键结构域,而BoLAⅡβ的β1β2和TC结构域均具有与Ii在细胞内共定位功能.本研究为进一步研究牛BoLA分子与Ii在免疫应答中的转运及其机理提供了重要实验依据.

关键词

牛/恒定链(Ii)/牛白细胞抗原(BoLA)/结合/共定位

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基金项目

出版年

2022
农业生物技术学报
中国农业大学 中国农业生物技术学会

农业生物技术学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.801
ISSN：1674-7968
参考文献量3
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