摘要
子宫蓄脓是母犬(Canis lupus familiaris)常见的生殖疾病之一,其主要诱因包括激素分泌异常和细菌感染.子宫内膜是激素应答的靶器官,子宫内膜细胞的异常活化会导致大量炎性因子释放,引起炎症反应,然而在炎症环境下类固醇激素对犬子宫内膜基质细胞的免疫调控作用知之甚少.本研究旨在探讨类固醇激素雌二醇(estradiol,E2)和孕酮(progesterone,P4)调控体外培养的犬子宫内膜基质细胞(endometrial stromal cells,ESCs)Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)及相关炎性因子的分泌规律.临床采集子宫蓄脓犬和健康犬的外周血血清,利用ELISA方法检测血清中E2和P4的浓度;应用胶原酶消化法分离获取健康犬子宫内膜基质细胞并进行免疫荧光鉴定;以检测到的E2(0.2 nmol/L)和P4(0.1μmol/L)作用于细胞,利用噻唑蓝(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)法测定E2和P4对细胞体外生长的影响;再分别与1μg/mL的细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)共同处理细胞,通过qPCR检测LPS诱导6、12和24 h犬子宫内膜基质细胞中TLR4和炎性因子的基因表达.免疫荧光鉴定结果显示,犬子宫内膜基质细胞纯度较高.MTT检测结果显示,P4单独作用及E2和P4联合处理能显著促进细胞的体外增殖.qPCR结果显示,与对照组相比,LPS刺激后TLR4和炎性因子的基因表达量均显著上调(P<0.05);与LPS组相比,P4单独处理与E2和P4联合处理可显著下调LPS刺激引起的TLR4和炎性因子基因过量表达(P<0.05).上述结果提示E2和P4可能在子宫内膜的免疫调节中发挥重要作用.本研究为阐明子宫蓄脓发生的分子机制及E2和P4对子宫内膜先天性黏膜免疫的影响提供基础资料.
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