摘要
减毒单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)作为一种安全高效的异源抗原递呈载体可用于肿瘤免疫治疗.缺失重要毒力基因是目前较为成熟的李斯特菌减毒策略.基因缺失减毒菌株ΔactAΔinlB(简称ΔAB)是其中一种较为成熟、安全的李斯特菌肿瘤免疫治疗疫苗载体.本研究旨在ΔAB基础上,利用肿瘤相关抗原与重要毒力因子融合表达的创新手段,构建一种能高效表达和递呈宫颈癌相关抗原E7的肿瘤疫苗载体(ΔAB-E7),以肿瘤生物学方法评估ΔAB-E7在小鼠(Mus musculus)宫颈癌模型中的免疫治疗效果.本研究利用细菌分子遗传操作技术构建ΔAB,在ΔAB基础上构建李斯特菌溶血素O(Listeriolysin O,LLO)和肿瘤抗原E7融合表达的ΔAB-E7;通过Western blot验证ΔAB-E7菌株中的E7抗原能否与LLO融合表达;利用细菌体外培养以及吞噬细胞内增殖实验研究体外生长能力,细胞内复制和增殖能力;通过小鼠脏器内细菌增殖实验评估ΔAB及ΔAB-E7在小鼠体内的增殖能力;构建小鼠宫颈癌模型,通过记录肿瘤模型在小鼠体内的生长趋势评价ΔAB-E7的免疫治疗效果.结果显示,ΔAB-E7菌株的E7抗原能与LLO融合表达并正常分泌;ΔAB及ΔAB-E7菌株在体外生长能力与野生型无显著差异,并且在吞噬细胞中保持稳定的增殖能力;ΔAB及ΔAB-E7感染小鼠后致病力显著下降,在小鼠脏器中的增殖能力显著降低,表明其毒力减弱,在小鼠感染模型中具有安全性;在小鼠宫颈癌模型中,ΔAB-E7免疫治疗组小鼠肿瘤的生长趋势明显较对照组更慢,表明ΔAB-E7抑制肿瘤生长,展现了良好的免疫治疗效果.本研究制备了一种基于减毒李斯特菌的小鼠宫颈癌治疗载体疫苗,为人类宫颈癌及其他恶性肿瘤的免疫治疗提供技术支持.
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