摘要
匍柄霉(Stemphylium solani)是一种重要的植物病原真菌,可侵染多种作物.环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术具有简便、准确、快速等突出优点,在病原菌检测领域有广泛应用.本研究以SYBR GreenⅠ为指示剂,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(glyceraldehyde-2-phosphate dehy-drogenase,gpd)为检测靶标基因设计6条引物(2条内引物FIP/BIP,2条外引物F3/B3,环引物LF25/LB25)进行LAMP扩增,同时通过环引物加速反应,建立了一套茄匍柄霉LAMP快速检测体系.特异性验证结果显示,仅16株茄匍柄霉有阳性扩增,具有较高的特异性.灵敏度检测结果显示,该检测体系灵敏度达2.4 pg/μL,显著高于普通PCR检测技术.环引物加速LAMP反应结果表明,加入环引物能使反应时间缩短至27 min,可有效加速LAMP反应.通过钙黄绿素进行显色反应,在自然光下仅模板为茄匍柄霉的反应液变为绿色,其余反应液均为橙色.采用该体系检测茄匍柄霉接种后番茄(Lycopersicon esculentum)叶片病原菌含量动态变化,接种病原菌12 h时,该体系即有阳性显色反应,接种后颜色随时间推移逐渐加深,与接种病原菌后叶片发病情况的规律相同.该反应结果不借助其他仪器即可观察,环引物加速反应使检测时间进一步缩短至27 min,能够快速、准确反应病原菌含量.该体系在匍柄霉快速检测方面具有较强的优势,可用于病害潜伏、未显症期的快速检测,对及时、科学防治茄匍柄霉叶斑具有重要意义.
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