摘要
Ⅰ型胶原蛋白α1链(collagen typeⅠα1 chain,COL1A1)作为Ⅰ型胶原蛋白的重要组成成分,在参与调控卵泡发育及卵巢细胞增殖中发挥作用,与动物繁殖性状密切相关.为探究COL1A1基因与贵州黑山羊(Capra hircus)繁殖力间的关系,及其不同表达水平对产羔相关基因的影响,本研究采集单羔、多羔贵州黑山羊性腺轴组织(子宫,卵巢,垂体,下丘脑,输卵管),采用qPCR检测COL1A1基因在单羔、多羔山羊性腺轴中的表达水平,随后分离培养卵巢颗粒细胞;通过RNA干扰技术,构建目的基因的干扰载体,并转染至卵巢颗粒细胞中,使用qPCR及Western blot方法检测COL1A1基因及其蛋白的表达量,筛选最佳干扰组,再通过qPCR方法检测干扰COL1A1基因后对产羔相关基因骨形态发生蛋白15(bone morphogenetic protein 15,BMP15)、骨形态发生蛋白受体1B(bone morphogenetic protein receptor 1B,BMPR-1B)、生长分化因子9(growth differentiation factor 9,GDF9)和促卵泡激素β亚基(follicle stimulating hormoneβ-subunit,FSHβ)表达的影响.结果表明,COL1A1基因在单羔和多羔子宫、卵巢、垂体、下丘脑和输卵管组织中均有表达.其中在多羔组卵巢、下丘脑中表达量最高,且极显著高于单羔组(P<0.01),在垂体和输卵管中显著高于单羔组(P<0.05),在子宫中无显著性差异;免疫荧光结果表明,实验中分离培养的细胞为卵巢颗粒细胞;qPCR及Western blot结果表明,shRNA-COL1A1-2为最佳干扰组,而且抑制COL1A1基因的表达后,产羔相关基因BMP15、BMPR-1B、GDF9和FSHβ的表达量均极显著低于shRNA-NC组(P<0.01).本研究揭示了COL1A1基因在单羔、多羔贵州黑山羊性腺轴中的表达差异,其在多羔卵巢组织中的高表达及沉默COL1A1基因对产羔相关基因的抑制,说明COL1A1基因与卵巢发育及卵泡生长密切相关,可作为贵州黑山羊多羔品系选育的候选基因.
国家科技期刊平台
NSTL
维普
万方数据