摘要
维生素E在提高畜禽繁殖机能、提高免疫力及保护肝脏中起着非常重要的作用,其储存和代谢主要发生在肝脏中.α-生育酚转移蛋白(α-tocopherol transfer protein,α-TTP)是一种主要在肝脏中表达的蛋白质,可以特异性结合α-生育酚并促进其从肝脏转运到外周组织吸收利用.但有研究显示α-TTP在转运α-生育酚的过程中可能还需要其他互作因子的作用.本研究通过免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)和Pull-down筛选获得α-TTP的互作蛋白—肌球蛋白1D(myosin 1d,MYO1D),免疫荧光观察显示MYO1D与α-TTP存在明显共定位;利用Myo1d-shRNA慢病毒质粒,构建Myo1d基因的干扰载体,筛选获得稳定感染慢病毒干扰载体的肝细胞系;qRT-PCR检测结果显示,干扰组Myo1d基因表达极显著降低(P<0.01),干扰效率为46.83％,干扰组α-ttp基因表达无显著变化;试剂盒检测结果显示,Myo1d干扰组细胞内α-生育酚含量显著升高(P<0.05).上述结果提示,MYO1D可以与α-TTP相互作用介导肝细胞中α-生育酚转运,可能在运输α-生育酚-TTP复合物的过程中提供动力.本研究为筛选α-TTP转运α-生育酚过程中的互作因子提供了实验基础,为进一步研究肝脏内α-TTP转运α-生育酚的机制提供了参考依据.
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