摘要
槐耳(Vanderbylia robiniophila)是一种重要的药用大型真菌,因目前野生资源逐渐稀少,人工栽培周期长、成本高,造成槐耳子实体来源紧缺,阻碍了槐耳活性成分多糖的获取,从槐耳发酵液中提取活性多糖是一种重要途径.为丰富槐耳的菌种资源,提升发酵液中活性化合物多糖的产量,本研究对1株野生槐耳WH5进行组织分离获得纯培养物,结合形态与内部转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列分析对其进行鉴定,在单因素实验的基础上结合正交实验对槐耳WH5的液体发酵工艺进行优化;利用体外细胞实验分析发酵液中胞外多糖对肿瘤细胞的抑制活性.结果表明,获得的WH5菌株ITS序列长度为637 bp,与槐耳(GenBank No.KX081122.1)有最高相似性,为99％,且在系统发育树聚集在一个分支上,结合子实体和菌丝形态,确定WH5菌株为槐耳.WH5菌株的最佳液体发酵工艺为:可溶性淀粉30 g/L,蛋白胨15 g/L,MgSO4•7H2O 1.0 g/L,KH2PO42.0 g/L,pH 7.0,转速为160 r/min,发酵温度为30℃,发酵时间为9 d,菌丝和胞外多糖的产量分别为27.52和1.91 g/L.发酵液中的胞外多糖可以抑制B16和Hep-3B肿瘤细胞,其半数抑制浓度(IC50)分别为:24.12和13.25 mg/mL.本研究对丰富槐耳菌种资源以及促进槐耳发酵液中多糖的利用具有重要意义.
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