农业生物技术学报2022，Vol.30Issue(11) ：2246-2254.DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2022.11.017

FpgMBV1-P4基因的原核表达及多克隆抗体制备

Prokaryotic Expression of FpgMBV1-P4 Gene and Preparation of Its Polyclonal Antibodies

刘东伟 宋嘉庆 潘鑫 闫书味 李轲 范沛 高飞 张晓婷 代君丽 李洪连
农业生物技术学报2022，Vol.30Issue(11) ：2246-2254.DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2022.11.017
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FpgMBV1-P4基因的原核表达及多克隆抗体制备

Prokaryotic Expression of FpgMBV1-P4 Gene and Preparation of Its Polyclonal Antibodies

刘东伟 1宋嘉庆 1潘鑫 1闫书味 1李轲 1范沛 2高飞 1张晓婷 1代君丽 1李洪连3
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作者信息

  • 1. 河南农业大学植物保护学院,郑州450002
  • 2. 河南工业大学生物工程学院,郑州450001
  • 3. 河南农业大学植物保护学院,郑州450002;小麦玉米作物学国家重点实验室,郑州450046
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摘要

假禾谷镰孢巨型双链RNA病毒1(Fusarium pseudograminearum megabirnavirus 1,FpgMBV1)是从假禾谷镰孢(Fusarium pseudograminearum)弱毒菌株FC136-2A中发现的一种真菌病毒.FpgMBV1共编码4个蛋白质,其中FpgMBV1-P4由268个氨基酸残基组成,功能未知.本研究设计特异性引物,采用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)方法从菌株FC136-2A的菌丝中扩增FpgMBV1-P4基因,构建原核表达载体pGEX4T-FpgMBV1-P4并转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)菌株,在25℃以0.5 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达重组蛋白.结果表明,FpgMBV1-P4基因长为807 bp,重组表达的融合蛋白分子量约为60 kD,与预期大小相符.将该重组蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔(Lepus sinensis),获得抗血清,采用间接ELISA测定其效价达1:160000,能够特异性检测到假禾谷镰孢菌丝中约36 kD的FpgMBV1-P4蛋白.研究结果为深入分析FpgMBV1-P4的结构和功能及进一步探讨FpgMBV1与假禾谷镰孢菌的相互作用提供了基础.

关键词

真菌病毒/假禾谷镰孢巨型双链RNA病毒1(FpgMBV1)/P4蛋白/原核表达/多克隆抗体

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基金项目

出版年

2022
农业生物技术学报
中国农业大学 中国农业生物技术学会

农业生物技术学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.801
ISSN：1674-7968
被引量1
参考文献量11
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