摘要
转铁蛋白受体(transferrin receptor,TfR)是一种位于细胞膜上的Ⅱ型跨膜二聚体糖蛋白,是犬(Canis lupus familiaris)、猫(Felinae)等肉食动物细小病毒(Carnivorous parvovirus)侵入宿主细胞的受体.为了建立一种检测肉食兽TfR基因表达的TaqMan实时荧光定量PCR方法,并对肉食兽不同组织和传代细胞中的TfR基因表达进行检测分析.本研究参考GenBank中公布的犬、猫的TfR胞外区蛋白基因序列设计合成1对引物和1条特异性TaqMan探针,优化qPCR的反应体系和条件,构建阳性质粒,建立标准曲线,进行敏感性、重复性检验,并使用建立的方法对肉食兽不同组织和传代细胞中的TfR基因表达水平进行了检测分析.结果表明,本研究建立的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法线性关系良好,相关系数为0.9987;敏感性高,最低检测浓度为67 copies/µL;重复性好,批内和批间评价实验变异系数均小于2.0％.本研究建立了一种检测肉食兽TfR的qPCR方法,敏感性和重复性好,可用于肉食兽不同组织和传代细胞中TfR基因表达的检测.
基金项目
山东省专业学位研究生教学案例库项目(2021)(SDYAL21174)
青岛农业大学专业学位研究生教学案例库建设项目(2020)(QNYAL2002)
青岛农业大学大学生创新创业训练计划(2021)()
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