摘要
鸟嘌呤核苷酸结合蛋白q多肽(G protein subunit alpha q,GNAQ)通过编码Gαq蛋白调节G蛋白偶联受体和介导下游信号通路,在营养代谢、繁殖调控以及细胞信号传导等生理过程中参与调节.为研究GNAQ在雌性牦牛(Bos grunniens)生殖轴系中的表达情况,本研究选取成年健康卵泡期雌性牦牛的下丘脑、垂体和卵巢组织,以牦牛卵巢cDNA为模板,采用逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)技术克隆得到GNAQ基因完整的CDS序列,并进行生物信息学分析;以qRT-PCR、蛋白质免疫印迹(Western blot)和免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)方法对GNAQ基因和蛋白在牦牛下丘脑-垂体-卵巢生殖轴(hypothalamic-pituitary-ovarian axis,HPOA)的表达进行检测和定位.结果表明,牦牛GNAQ基因(GenBank No.OP811271)的CDS区全长1080 bp,编码359个氨基酸;牦牛GNAQ基因与普通牛(B.taurus)同源性高,与小鼠(Mus musculus)同源性较低,在物种进化过程中高度保守.经qRT-PCR、Western blot检测发现,GNAQ基因和蛋白在牦牛HPOA轴的下丘脑、垂体以及卵巢中呈现不同程度的表达,在垂体中的表达量最高,在下丘脑中表达水平显著高于卵巢(P<0.05).免疫组化结果显示,GNAQ蛋白在牦牛卵巢颗粒细胞呈强阳性表达,且主要表达于细胞质中,与亚细胞定位结果一致.本研究为深入探索GNAQ基因在牦牛生殖生理调控中的作用提供理论依据,为牦牛季节性发情调控规律及机制的研究提供参考.
基金项目
中国农科院创新工程项目(CAAS-ASTIP-2014-LIHPS-01)
现代农业产业技术体系建设专项肉牛牦牛项目(CARS-37)
中国农科院基本科研业务费院级统筹任务项目(1610322020009)
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