摘要
兔出血症(Rabbit hemorrhagic disease,RHD)是兔(Oryctolagus cuniculus)的一种高致死性传染病,其由兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)引起.膜联蛋白A2(annexin A2,ANXA2)与多种病毒的感染过程密切相关.为探究兔ANXA2在RHDV侵染兔肾细胞(rabbit kidney cell,RK13)过程中的作用,本研究利用PCR扩增获得兔ANXA2基因片段,构建真核表达载体pCD513B-ANXA2,并将其与包装质粒pLP1、pLP2和pLP/VSVG转染至293T细胞,包装出含ANXA2基因的慢病毒颗粒并感染RK13,利用嘌呤霉素筛选稳定过表达ANXA2蛋白的细胞株RK13-513B-ANXA2;应用qPCR和Western blot检测ANXA2基因及其蛋白的表达情况;设计合成siRNA并转染RK13,进而分析基因表达情况;以RHDV感染RK13-513B-ANXA2细胞株2 h后,采用qPCR、免疫荧光(immunological fluorescence assay,IFA)和Western blot检测RHDV吸附量的相对变化.结果表明,利用慢病毒载体包装获得滴度较高的病毒颗粒,其滴度达5.0×107～1.0×108 TU/mL;RK13-513B-ANXA2细胞中ANXA2基因及其蛋白表达量均极显著增加(P<0.01);过表达ANXA2蛋白的RK13对RHDV的吸附作用明显增加(P<0.01),干扰ANXA2蛋白表达可显著下调RHDV对RK13的吸附作用(P<0.05).本研究结果提示ANXA2可能参与RHDV对宿主细胞的感染,为进一步探究RHDV感染宿主细胞的机制提供了参考.
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