农业生物技术学报2023，Vol.31Issue(2) ：416-424.DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2023.02.019

CRISPR/Cas9介导敲除小鼠胚胎成纤维细胞IGF-1R基因的方法建立与验证

Construction and Verification of IGF-1R Gene Knockout System in Mouse (Mus musculus) Embryonic Fibroblasts Based on CRISPR/Cas9

于志勇 刘萌萌 姚枭洋 胡学远 接金磊 迟良 刘焕奇
农业生物技术学报2023，Vol.31Issue(2) ：416-424.DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2023.02.019
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CRISPR/Cas9介导敲除小鼠胚胎成纤维细胞IGF-1R基因的方法建立与验证

Construction and Verification of IGF-1R Gene Knockout System in Mouse (Mus musculus) Embryonic Fibroblasts Based on CRISPR/Cas9

于志勇 1刘萌萌 2姚枭洋 1胡学远 1接金磊 1迟良 1刘焕奇3
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作者信息

  • 1. 青岛农业大学动物医学院,青岛266109
  • 2. 青岛市智慧乡村发展服务中心,青岛266100
  • 3. 青岛农业大学动物医学院,青岛266109;青岛农业大学巴瑟斯未来农业学院,青岛266109
  • 折叠

摘要

胰岛素样因子1型受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-1R)基因在哺乳动物的生长发育和代谢中发挥着重要作用.本研究通过Gibson无缝链接(Gibson assembly)和重叠延伸PCR(genes plicing by overlap extension PCR,SOE PCR),利用pSMART LCKan载体将向导RNA(small guide RNA,sgRNA)插入lentiCRISPR v2质粒进行改造,构建IGF-1R基因敲除载体,通过菌液PCR、双酶切、基因测序对敲除载体进行评估;将该载体转染至小鼠(Mus musculus)胚胎成纤维细胞中,通过Western blot比较敲除组和对照组细胞IGF-1R蛋白表达量.结果表明,IGF-1R基因敲除载体构建成功;敲除组细胞IGF-1R蛋白表达量极显著降低(P<0.01),表明成功敲除了小鼠胚胎成纤维细胞中IGF-1R基因.本研究改进了CRISPR/Cas9敲除系统表达载体的构建过程,为进一步在细胞层次研究IGF-1R基因的作用机制提供有力工具.

关键词

CRISPR/Cas9/胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)/小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)/载体构建

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基金项目

山东省现代农业产业技术体系建设项目创新团队项目(SDAIT-09-05)

出版年

2023
农业生物技术学报
中国农业大学 中国农业生物技术学会

农业生物技术学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.801
ISSN：1674-7968
参考文献量1
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