摘要
细极链格孢菌(Alternaria tenuissima)是引起浙贝母(Fritillaria thunbergii)黑斑病的病原真菌之一.为解决当前浙贝母黑斑病无法实现田间快速检测的问题,本研究制备了针对细极链格孢菌的单克隆抗体(单抗)(monoclonal antibody,McAb)及其胶体碳免疫层析试纸条.利用细极链格孢菌菌丝和孢子混合液作为免疫原,通过杂交瘤技术获取能分泌针对细极链格孢菌的特异性单抗的细胞株,采用间接ELISA法测定单抗的效价、灵敏度和特异性,再采用Western blot检测抗体结合蛋白,利用双抗夹心法制备胶体碳免疫层析试纸条.最终获得了5株细胞株,分别命名为AtA1、AtA8、AtD2、AtG7和AtH9.由细胞株分泌的5种单抗与交链格孢(A.alternata)、茄病镰刀菌(Fusarium solani)、变红镰刀菌(F.incarnatum)、木贼镰刀菌(F.equiseti)、尖孢镰刀菌(F.oxysporum)、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、Phomopsis oblonga和茎点霉属真菌(Phoma sp.)等浙贝母常见病原真菌均不发生交叉反应.5种单抗的效价均高于105倍,分别与细极链格孢菌30、30、43、148和50 kD的抗原蛋白结合,抗体类型分别为IgG2a、IgG3、IgM、IgG2a和IgM,其中AtA1、AtA8和AtG7的检测灵敏度均为12.21 ng/mL,AtD2和AtH9的检测灵敏度均为24.41 ng/mL.浙贝母蛋白提取液对5种单抗的检测灵敏度均无影响.基于单抗AtA1和AtH9的胶体碳免疫层析试纸条可用于细极链格孢菌及其引发的浙贝母黑斑病的检测.该试纸条具有灵敏度高、特异性强、操作简单、快速经济和适于田间大量检测等优势,为浙贝母黑班病的早发现、早防治提供了技术支撑.
基金项目
浙江省基础公益研究计划(LGN21C140004)
浙江省中医药科技计划(2020B060)
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