摘要
尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)选择性自噬接头受体蛋白1(sequestosome 1 receptor protein,Sqstm1)是一种选择性自噬接头蛋白,可选择性参与清除细胞内受损的细胞器和蛋白质.为分析sqstm1基因的功能,研究其在健康尼罗罗非鱼各组织中的表达分布及抗菌抗病毒应答过程中的表达模式,本研究克隆了On-sqstm1基因(GenBank No.XP_005463852)ORF序列,通过生物信息学及亚细胞定位分析On-sqstm1基因的序列和定位特征,利用qPCR技术分析其在健康罗非鱼各组织及不同刺激物刺激后各组织中的表达模式,采用双荧光素酶报告系统检测On-sqstm1基因过表达对核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)活性的影响.结果显示,本研究成功克隆了On-sqstm1基因的ORF序列,长度为1287 bp,编码428个氨基酸;亚细胞定位结果显示On-Sqstm1蛋白定位于细胞质.qPCR结果显示On-sqstm1基因在罗非鱼各组织中均有表达,在肝脏中表达量最高;在无乳链球菌(Streptococcus agalctiae)和Poly I:C病毒类似物刺激后,该基因在罗非鱼的脑、头肾、肝脏、肠道及脾脏组织中的表达量均显著上调(P<0.05).双荧光素酶报告系统显示On-Sqstm1蛋白可以显著激活NF-κB活性.以上结果显示,On-Sqstm1蛋白可能通过介导NF-κB信号通路的活性参与对病原体感染的免疫应答过程.本研究为进一步研究On-Sqstm1蛋白的作用机制提供了参考.
基金项目
国家自然科学基金(32073006)
广东省自然科学基金(2022A1515010553)
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