摘要
葱潜隐病毒(Shallot latent virus,SLV)是危害珠葱(Allium cepa var.aggregatum)等葱属植物的主要病毒之一,在葱属植物种植区普遍存在.本研究根据GenBank中已登录的SLV外壳蛋白(coat protein,CP)基因保守区,设计并合成1对特异性引物,通过对引物浓度和退火温度进行优化,建立了基于SYBR GreenⅠ的SLV实时荧光RT-PCR(reverse transcription PCR)检测方法.该方法标准曲线Ct值与模板浓度的对数呈良好的线性关系,扩增效率为94.529％,相关系数R2为0.9996;与胡葱黄条病毒(Shallot yellow stripe virus,SYSV)、洋葱黄矮病毒(Onion yellow dwarf virus,OYDV)和青葱X病毒(Shallot virus X,SVX)均无交叉反应;最低检出限为10-7倍稀释cDNA,为常规RT-PCR的1000倍;组内和组间变异系数分别为0.02％～0.63％和0.03％～1.24％,表明该方法稳定性好.利用该方法对珠葱叶和鳞茎的SLV含量进行测定,并对50份疑似SLV感染的珠葱样品进行检测,结果表明,珠葱叶中SLV含量明显高于鳞茎,且SYBR GreenⅠ实时荧光RT-PCR检出46份阳性样品,检出率较常规RT-PCR高6％.本研究基于SYBR GreenⅠ建立的SLV实时荧光RT-PCR方法为珠葱SLV的快速检测提供技术支持.
基金项目
吉林省农业科技创新工程项目(CXGC2021ZY011)
吉林省科技厅重点科技研发项目(20230202108NC)
国家重点研发计划子课题(2017YFD0201604)
国家科技期刊平台
NSTL
维普
万方数据