农业生物技术学报2023，Vol.31Issue(4) ：883-888.DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2023.04.020

变形假单胞菌ExsA蛋白表达、纯化及多克隆抗体的制备

Expression, Purification and Polyclonal Antibody Preparation of Pseudomonas plecoglossicida ExsA Protein

韦金平 李云凤 邱薇 陈兴莆 陈波宇 陈新华 覃盼
农业生物技术学报2023，Vol.31Issue(4) ：883-888.DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2023.04.020
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变形假单胞菌ExsA蛋白表达、纯化及多克隆抗体的制备

Expression, Purification and Polyclonal Antibody Preparation of Pseudomonas plecoglossicida ExsA Protein

韦金平 1李云凤 1邱薇 1陈兴莆 1陈波宇 1陈新华 1覃盼1
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作者信息

  • 1. 福建农林大学海洋学院,福州350002;福建省海洋生物技术重点实验室,福州350002
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摘要

Ⅲ型分泌系统(typeⅢsecretion system,T3SS)是革兰氏阴性菌中普遍存在的蛋白分泌机制,是细菌毒力因子产生致病效果的重要途径.阿糖胞苷(Ara-C)型DNA结合蛋白ExsA是T3SS的主要激活因子之一,能够调控T3SS相关蛋白的表达.本研究将变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)PQLYC4菌株的ExsA基因克隆至原核表达载体pET28a(+),将重组表达质粒pET-28a-ExsA转化至大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达.结果显示,大肠杆菌表达的重组ExsA蛋白分子量略小于30 kD,与预期分子量(29.7 kD)一致.将表达的重组ExsA蛋白进行纯化,免疫新西兰大白兔(Oryctolagus cuniculus)制备抗ExsA蛋白的多克隆抗体,效价达1:256000以上;利用制备的抗体,采用Western blot和间接免疫荧光方法,检测变形假单胞菌菌体中的ExsA蛋白和鲤鱼(Cyprinus carpio)上皮细胞(epithelioma papulosum cyprini,EPC)中过表达的ExsA蛋白,均可发生特异性反应.本研究为深入探讨ExsA蛋白结构及其在调控变形假单胞菌毒力因子T3SS系统中的功能提供了工具.

关键词

变形假单胞菌/ExsA/原核表达/蛋白纯化/多克隆抗体

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基金项目

国家自然科学基金(U1905204)

现代农业产业技术体系建设专项(CARS-47)

出版年

2023
农业生物技术学报
中国农业大学 中国农业生物技术学会

农业生物技术学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.801
ISSN：1674-7968
参考文献量5
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