摘要
E2F转录因子1(E2F transcription factor 1,E2F1)和TATA结合蛋白(TATA-binding protein,TBP)共同参与了基因转录调节.为探究鸡(Gallus gallus)E2F1和TBP蛋白的相互作用及其基因组织表达特性,本研究通过构建鸡E2F1和TBP基因的重组真核表达载体,共同转染人胚胎肾细胞(HEK-293T)后,利用间接免疫荧光和免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)实验验证两者的相互作用;采用qPCR检测鸡E2F1、TBP基因在胚胎发育14 d(E14 d)、出壳后1日龄(H1 d)、7日龄(H7 d)和14日龄(H14 d)不同组织中的表达情况.结果表明,成功构建了鸡E2F1和TBP基因的重组真核表达载体pCMV-HA-E2F1、pCMV-Myc-TBP,其在细胞中得到正确表达且两者均主要定位在细胞核.Co-IP结果表明,鸡E2F1和TBP蛋白存在相互作用.组织表达特性分析表明,鸡E2F1和TBP基因在4个阶段的不同组织中均有表达,且其表达水平存在显著差异(P<0.05);在E14 d时,E2F1和TBP基因在肺脏中表达较高,在脑组织中的表达较低;H1 d时,两者在肝脏中表达较高,在脑组织中的表达较低;H7 d时,两者在脑组织中表达较高,在腿肌中的表达较低;H14 d时,两者在肺脏、肝脏和心脏中表达较高,在胸肌、腿肌中的表达较低.鸡E2F1和TBP蛋白在细胞核中存在相互作用,E2F1和TBP基因在4个阶段的多种组织中均有表达,但以肺脏和肝脏中的相对表达较高.本研究为E2F1和TBP蛋白互作调控鸡肺脏和肝脏组织发育的作用机理提供参考.
基金项目
国家自然科学基金(31960698)
国家自然科学基金(31760732)
贵州省省级科学技术项目(黔科合基础[2020]1Y134号)
贵州大学培育项目(贵大培育[2021]14号)
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