摘要
中药成分槲皮素(quercetin,QUE)是一种具有抗炎抗氧化作用的黄酮类化合物.本研究旨在探讨QUE对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠(Mus musculus)乳腺上皮细胞(mouse mammary epithelial cells,MMECs)炎症损伤的保护机制,为临床治疗奶牛(Bos taurus)乳腺炎提供理论依据.首先通过CCK-8(Cell Counting Kit-8)成功筛选出体外实验中LPS最佳致炎浓度、药物QUE最适剂量和LPS+QUE最适剂量;然后以LPS诱导MMECs出现炎症,分为对照组、模型组(10μg/mL LPS)、LPS+QUE高剂量组(125μg/mL)、LPS+QUE中剂量组(62.5μg/mL)和LPS+QUE低剂量组(31.25μg/mL);最后通过形态学观察确定MMECs的生长状态,利用免疫荧光法鉴定MMECs,利用qRT-PCR和Western blot方法检测炎症相关因子的表达变化.结果显示,该细胞中存在特异性蛋白CK-18,证明为MMECs;经10μg/mL LPS诱导细胞炎症12 h,炎症相关因子TNFα和IL6的基因表达量极显著高于空白对照组(P<0.01),证明MMECs致炎成功;QUE作用于MMECs后,qRT-PCR和Western blot检测显示炎症相关因子TNFα、IL6、NF-κB、AKT基因及蛋白表达下调且呈现剂量依赖性.因此,QUE可能通过抑制PI3K-AKT/NF-κB信号通路改善LPS诱导的小鼠乳腺上皮细胞炎症反应,降低下游炎症因子TNFα和IL6的表达,从而发挥抗炎作用.本研究为临床治疗奶牛乳腺炎和开发潜在抗炎药物提供基础资料.
基金项目
甘肃省动物生殖生理及繁殖调控重点实验室项目(20JR10RA563)
宁夏自治区重点研发项目(2019BBF02027)
甘肃省引导科技创新发展专项(GSCXZX-2019-1)
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