摘要
A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)是一种新型的小RNA病毒,严重危害我国养猪业的发展.目前尚无有效的SVA疫苗,为探究SVA新型亚单位疫苗,本研究以SVA的病毒结构蛋白2(viral structural protein 2,VP2)基因序列为基础,选取利用生物信息学方法预测的B细胞表位序列及已报道的口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)3A蛋白的T细胞表位基因,密码子优化后通过柔性连接肽进行串联连接,分别构建重组表达质粒pET28a-rSVP2-B和pET28a-rSVP2-BT.将原核可溶性表达并纯化的重组串联表位蛋白rSVP2-B和rSVP2-BT,经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),评价其免疫原性.结果显示,重组质粒转化至大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),经诱导表达后,目标蛋白均正确表达,SDS-PAGE分析显示,其相对分子质量分别为34和38 kD.Western blot结果显示,rSVP2-B和rSVP2-BT与SVA阳性血清均具有良好的反应原性.纯化后rSVP2-B和rSVP2-BT免疫小鼠产生的体液免疫水平无显著差异,均诱导产生了较强的特异性IgG抗体及IgG1抗体,且主要诱导偏向于Th2型的体液免疫应答.病毒中和实验结果显示,2种重组蛋白的中和抗体效价介于1:64～1:128.同时,rSVP2-B和rSVP2-BT免疫小鼠也产生了较强的细胞免疫,其中rSVP2-BT免疫组的脾淋巴细胞增殖水平、细胞因子白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)和干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)水平显著高于rSVP2-B.以上结果表明,成功制备了具有良好免疫原性的重组串联多表位蛋白rSVP2-B和rSVP2-BT,rSVP2-BT的免疫原性优于rSVP2-B.本研究为SVA多表位疫苗研制提供理论依据.
基金项目
甘肃省科技重大专项(21ZD3NA001)
中国农业科学院兰州兽医研究所基本科研业务费专项(1610312021013)
国家生猪产业技术体系建设项目(CARS-35)
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