摘要
三基序蛋白25(tripartite motif containing 25,TRIM25)是宿主抗病毒免疫应答中发挥重要作用的TRIM蛋白家族成员之一.为了解虹鳟(Oncorhynchus mykiss)TRIM25基因分子特征及其在感染传染性造血器官坏死病毒(Infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)过程中的表达变化,本研究采用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术获得虹鳟TRIM25基因cDNA全长序列(GenBank No.OL692831),并对其进行生物信息学分析,同时利用qPCR技术检测TRIM25基因在健康虹鳟不同组织及感染IHNV后不同时间点(0,6,12,24,48,72,96,120和144 h)肠道、肝脏、脾脏、皮肤、头肾和鳃中的表达变化.结果显示,虹鳟TRIM25基因cDNA全长序列4 745 bp,其开放阅读框2 028 bp,编码675个氨基酸.生物信息学分析表明,TRIM25蛋白分子量为76.04 kD,理论等电点为8.79,不稳定系数为49.2,平均亲水系数为−0.591,属于不稳定亲水蛋白.对TRIM25蛋白结构域分析发现,该蛋白包含RING、B-boxes、B-Box C-terminal domain和PRY-SPRY结构域.同源比对及系统进化树分析表明,虹鳟与大马哈鱼(Oncorhynchus keta)同源性最高(94.96%)且亲缘关系最近,与哺乳动物和两栖动物同源性较低.qPCR检测发现,TRIM25基因在健康虹鳟各组织中均有表达,其在肝脏中的表达量最高,头肾和脑中的表达量次之,皮肤中的表达量最低.感染IHNV后,TRIM25基因在肝脏、头肾、脾脏、肠道和皮肤的表达量均在48h达到峰值,鳃在96h表达量达到峰值,各组织在峰值时的表达量与对照组相比差异极显著(P＜0.01),其中以头肾和脾脏表达变化较显著,分别为对照组的5.72和4.33倍.上述结果表明,TRIM25基因可能在虹鳟抗IHNV感染的免疫应答中发挥着重要作用.本研究为深入研究TRIM25基因在鱼类抗病毒免疫调控中的作用提供了基础资料.
基金项目
甘肃省现代丝路寒旱农业科技支撑计划(GSLK-2021-16)
甘肃农业大学伏羲青年英才培育计划(Gaufx-02Y08)
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