摘要
鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus,AngHV)是鳗鲡(Anguilla)的一种重要病毒性病原,可引起养殖鳗鲡暴发"脱黏败血综合征",给养殖者造成巨大的经济损失.开展AngHV的免疫原性蛋白研究对于开发AngHV的免疫学诊断技术及亚单位疫苗具有重要意义.为了获得鳗鲡疱疹病毒的免疫原性蛋白,本研究通过质谱分析AngHV病毒粒子结构蛋白,筛选到ORF36,对其氨基酸序列进行生物信息学分析,克隆至原核表达载体进行诱导表达;用纯化的重组表达蛋白制备兔抗多克隆抗体,评价该抗体检测AngHV的特异性、灵敏性以及病毒中和效果,并对ORF36进行病毒粒子结构定位.结果显示,通过质谱鉴定出病毒的主要免疫原性蛋白ORF36;序列分析显示,ORF36无跨膜结构域,不含有信号肽,具有13个B细胞抗原表位,免疫原性良好;克隆ORF36至原核表达载体pET-30a,实现了其在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中的高效表达,重组表达蛋白大小约为40 kD;ELISA检测显示,制备的兔抗ORF36多克隆抗体效价为1∶8 000;Western blot结果显示,该抗体能特异性识别感染AngHV的鳗鲡卵巢细胞系(eel ovary cell line,EO)及鳗鲡组织,最低可检测的内脏组织的病毒量为1 000 PFU;抗体中和试验表明,制备的兔抗ORF36多克隆抗体具有中和作用,能显著降低AngHV的病毒滴度;ORF36的病毒粒子定位分析表明,ORF36是病毒粒子的结构蛋白且定位于核衣壳上.本研究鉴定出病毒的主要免疫原性蛋白ORF36,制备了具有病毒中和作用的ORF36多克隆抗体,明确了ORF36为AngHV核衣壳结构蛋白,为阐明ORF36在AngHV侵染过程中的作用及开发病毒亚单位疫苗提供了参考.
基金项目
福建省公益类科研院所基本科研专项(2021R1027007)
福建省科技厅星火项目(2021S0001)
福建省农业科学院"5511"协同创新工程建设项目(XTCXGC2021013)
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