摘要
溶血磷脂酸酰基转移酶4(1-acylglycerol-3-phosphate O-acyltransferase 4,AGPAT4)是1-酰基甘油-3-磷酸O酰基转移酶家族的成员,具有催化甘油三酯合成的作用.为了阐明AGPAT4在山羊(Capra hircus)乳腺上皮细胞(goat mammary epithelial cells,GMECs)中的基因序列、结构以及AGPAT4对GMECs脂肪酸合成代谢的影响.本研究以西农萨能奶山羊乳腺上皮细胞为实验材料,通过RT-PCR克隆AGPAT4基因,应用在线网站进行生物信息学分析,干扰与过表达AGPAT4进行功能分析.结果表明,本研究成功克隆得到AGPAT4基因CDS区1137 bp(sequence ID:XM_005684959.3),编码378个氨基酸,蛋白分子量为43939.35 u,理论pI值为8.92,存在跨膜结构,无信号肽,为携带正电荷的不稳定蛋白;AGPAT4蛋白与AGPAT1、AGPAT2、脂蛋白3(lipin3,LPIN3)、二酰基甘油激酶(diacylglycerol kinases,DGK)、磷脂酶D(phospholipase D,PLD)、胞苷二磷酸-二酰基甘油合成酶(cytidine diphosphate-diacylglycerol synthase,CDS)等蛋白存在互作关系;干扰AGPAT4显著下调乙酰辅酶A羧化酶(acetyl coa carboxylase,ACC)基因表达(P＜0.05);过表达AGPAT4显著上调硬脂酰辅酶A去饱和酶1(stearoyl-coenzyme A desaturase,SCD1)与ACC基因表达(P＜0.05)并显著促进细胞内甘油三酯积累(P＜0.05).以上结果表明,AGPAT4基因在山羊乳腺上皮细胞中对脂合成具有正向调控作用.本研究为后续开展AGPAT4基因对羊奶乳脂代谢的调控机制研究提供了基础资料.
基金项目
国家科技重大专项转基因新品种培育项目(2018ZX0800802B)
国家自然科学基金(31772575)
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