摘要
奶山羊(Capra hircus)品种选育的重要指标包括乳腺上皮细胞的数量和活性、泌乳量大小和乳成分.乳腺生长、发育及泌乳活动涉及复杂的调控过程.circACAP2(circular ArfGAP with coiled-coil,ankyrin repeat and PH domains 2)可以促进心肌细胞凋亡,同时在乳腺癌组织中高表达,加快乳腺癌进程,但其对奶山羊乳腺上皮细胞(goats mammary epithelial cells,GMECs)的调控作用尚不清楚.本研究构建circACAP2过表达和干扰载体,并转染GMECs,双荧光素酶活性分析结果显示,circACAP2能与miR-21靶向结合;qRT-PCR结果显示,circACAP2干扰使miR-21表达量显著提高.细胞增殖检测试剂盒CCK8(Cell Counting Kit-8)和5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(5-ethynyl-2'-deoxyuridine,EdU)检测结果表明,circACAP2对GMECs增殖具有抑制作用;AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒和流式细胞仪检测结果显示,circACAP2对GMECs凋亡具有促进作用.ELISA试剂盒检测结果显示,circACAP2使GMECs的β-酪蛋白和甘油三酯分泌量降低.对ERK-Bax/Bcl-2凋亡信号通路和PI3K/mTOR/S6K泌乳信号通路相关分子进行Western blot检测,结果表明,circACAP2抑制pERK1/2和Bcl-2表达、促进Bax表达,同时PI3K、mTOR和S6K蛋白的磷酸化水平下降.上述研究结果表明,CircACAP2可能通过激活ERK-Bax/Bcl-2凋亡相关信号通路而促进GMECs凋亡,同时通过抑制泌乳相关的PI3K/mTOR/S6K信号通路而减少GMECs的β-酪蛋白和甘油三酯分泌.本研究为深入探讨关中奶山羊泌乳机理提供了基础资料.
基金项目
陕西省重点研发计划(2020ZDLNY02-01)
西北农林科技大学合水奶山羊试验示范基地项目(K4050422535)
金昌肉羊试验示范基地项目(Z222021501)
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