摘要
单组分双生病毒V2蛋白在病毒侵染过程中行使重要功能,而双组分双生病毒AV2蛋白功能的研究相对较少.为揭示双组分双生病毒新竹番茄曲叶病毒(Tomato leaf curl Hsinchu virus,ToLCHsV)AV2蛋白功能,本研究利用邻近依赖的生物素鉴定(proximity-dependent biotin identification,BioID)-质谱联用技术,在本氏烟(Nicotiana benthamiana)中初步筛选出与AV2邻近的多个寄主蛋白.利用酵母双杂交(yeast two hybrid,YTH)和双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)验证了本氏烟甲羟戊酸激酶a(N.benthamiana mevalonate kinase a,NbMVKa)和ToLCHsV-AV2存在互作.利用烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)诱导的基因沉默技术,将ToLCHsV侵染性克隆接种NbMVKa沉默的本氏烟,接种10d后,NbMVKa沉默的本氏烟症状不明显,而未沉默植株表现叶片卷曲,同时利用Southern blot分析发现,沉默植株的病毒DNA积累量相对减少;接种20d后,NbMVKa沉默的本氏烟和未沉默植株症状基本一致.结果表明,NbMVKa可能通过与ToLCHsV-AV2互作而对病毒致病起正调控的作用.本研究结果为进一步阐明双组分双生病毒AV2蛋白功能提供理论依据.
基金项目
国家自然科学基金(31870150)
福建农林大学科技创新项目(CXZX2020017A)
福建农林大学优秀博士学位论文项目(324-1122yb073)