摘要
A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)是一种新近流行的小RNA病毒,严重危害着全球养猪业的健康发展.SVA病毒结构蛋白2(viral structural protein 2,VP2)在诱导机体免疫应答中发挥了重要的作用.为制备可溶性的SVA结构蛋白VP2,并系统分析其免疫原性,本研究首先以SVA/CH-FJ-2017毒株基因序列为基础,构建SVA-VP2蛋白重组表达质粒pET28a-SVA-VP2.然后将pET28a-SVA-VP2重组质粒与分子伴侣pTf16质粒共同转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞,利用分子伴侣TF(trigger factor)在原核表达系统中促进蛋白可溶性表达的特性,诱导表达可溶性的SVA-VP2重组蛋白.纯化目标蛋白经SDS-PAGE、Western blot鉴定后,免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),通过间接ELISA检测血清抗体水平,病毒中和试验测定中和抗体滴度,流式细胞术检测分析脾脏CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群,以及脾脏淋巴细胞增殖及细胞因子产生的情况.结果表明,利用分子伴侣TF16成功制备了可溶性的VP2重组蛋白,并且VP2重组蛋白能够与SVA阳性血清发生特异性免疫反应,免疫组小鼠的血清抗体效价可达1∶32000,中和抗体水平可达1∶128,免疫组小鼠脾脏CD4+和CD8+T淋巴细胞百分比含量极显著高于对照组(P＜0.001),干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、IL-4和IL-10等细胞因子表达水平极显著高于对照组(P＜0.001).本研究成功利用分子伴侣TF共表达制备了可溶性的重组VP2蛋白,且重组VP2蛋白在体内、外试验中均具有良好的免疫原性,能够引发机体产生较强的体液免疫应答和细胞免疫应答,为SVA亚单位疫苗和诊断制剂的研制提供了实验材料和理论依据.
基金项目
甘肃省科技重大专项(21ZD3NA001)
甘肃省自然科学基金(22JR5RA030)
甘肃省青年科技项目(20JR10RA474)
广东省农业科技创新十大主攻方向"揭榜挂帅"项目(十四五)(2022SDZG02)
中国农业科学院兰州兽医研究所所级基本科研业务费项目(1610312021013)
中国农业科学院兰州兽医研究所所级基本科研业务费项目(1610312022009)
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