摘要
道地药材浙贝母(Fritillaria thunbergii)是浙江省金华市、丽水市等地重要的经济作物之一.近年来真菌性病害频发,其中干腐病发病严重,影响浙贝母产量和质量.本研究采用病组织分离法在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(potato dextrose agar,PDA)上分离纯化浙贝母干腐病病原真菌;采用菌落形态、菌丝及孢子形态观察法初步鉴定病原真菌;分别用核糖体内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)、翻译延伸因子基因(translation elongation factor 1 alpha,TEF-1α)、RNA聚合酶Ⅱ亚基(the second largest subunit of the nuclear RNA polymerase enzymeⅡ,RPB2)、热激蛋白60(heat shock protein,HSP60)、3-磷酸甘油脱氢酶(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,G3PDH)和茄病镰刀菌特异性序列(ITS-specific fragment of Fusarium solani,SOL)等6个基因的序列对病原真菌基因组DNA进行PCR扩增并测序,在GenBank中进行同源性比对并构建系统发育树,确定菌种种类.采用有创菌饼法和无创菌饼法检测真菌的致病性.结果表明,从浙贝母干腐病病株中分离得到14株真菌分离物,通过PCR扩增和测序分析,最终鉴定出4种病原真菌;通过构建发育树以及致病性实验证明了致病菌分别为茄病镰刀菌(Fusarium solani)、尖孢镰刀菌(F.oxysporum)、变红镰刀菌(F.incarnatum)和木贼镰刀菌(F.equiseti).本研究明确了浙贝母干腐病致病菌亦可为变红镰刀菌和木贼镰刀菌,并经PCR扩增获得了变红镰刀菌(MN386064)和木贼镰刀菌(MN386065)的G3PDH基因的部分序列,丰富了2种镰刀菌的基因序列,同时也为后续相关研究提供比对基础.
基金项目
浙江省基础公益研究计划(LGN21C140004)
浙江省基础公益研究计划(2015C32076)
浙江省中医药科技计划(2020ZB060)
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