摘要
细胞-细胞及细胞-细胞外基质的粘附取决于细胞特有的粘附蛋白及其相关调节信号.非洲绿猴肾脏上皮细胞(African green monkey kidney epithelial cells,Vero)是流感病毒(Influenza virus)、新型冠状病毒(Novel coronavirus)等多种病毒繁殖、纯化和疫苗生产的优良细胞株,为进一步探寻与Vero细胞粘附相关的蛋白,继而有效提升大规模高密度悬浮培养,本研究利用基因修饰及无血清培养基细胞技术成功构建悬浮型Vero细胞,并通过串联质谱标签(tandem mass tag,TMT)定量蛋白质组学技术对贴壁培养Vero细胞(adherent culture Vero,Adh_Vero)和悬浮培养Vero细胞(suspension culture Vero,Sus_Vero)中与细胞粘附性能相关的差异表达蛋白进行分析,以期为与悬浮培养Vero细胞粘附相关的候选靶基因筛选提供依据.结果表明,与Adh_Vero细胞相比,Sus_Vero细胞中表达差异显著的蛋白质有190个,其中上调表达蛋白116个,下调表达蛋白74个.通过GO功能注释和KEGG通路富集筛选获得与粘附相关的差异表达蛋白6个,其中5个上调表达蛋白分别是多配体蛋白聚糖-4(syndecan 4,SDC4)、肌动蛋白调节器(enabled homolog,ENAH)、肌球蛋白轻链12β(myosin light chain 12β,MYL12β)、肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinas,MYLK)和封闭蛋白(occludin,OCLN),1种下调表达蛋白为整合素β2蛋白(integrin β2,ITGβ 2).qPCR检测表明,Sus_Vero中SDC4、OCLN、MYL12β、MYLK以及ENAH的mRNA水平极显著下调(P＜0.01),ITGβ2的mRNA水平极显著上调(P＜0.01).Western blot检测表明,Sus_Vero中SDC4蛋白表达量也比贴壁培养细胞中显著减少,与定量蛋白质组学蛋白质表达趋势一致.本研究结果初步揭示了Vero细胞的粘附机制,为进一步运用基因工程技术构建Sus_Vero提供了有效候选靶蛋白.
国家科技期刊平台
NSTL
维普
万方数据