摘要
红树林多生长在环境特殊多变的潮间带,该环境有利于稀有放线菌的生长及其活性化合物的产生.为探索湛江雷州沿海地区红树林放线菌菌种资源的多样性、新颖性及药用开发潜力,本研究采用10种不同的培养基,使用稀释涂布平板法对红树林根际土壤样品中的放线菌进行了分离.经纯化培养后,进行PCR扩增并对放线菌株的16S rRNA序列进行测序及系统发育分析;同时根据菌株的16S rRNA比对结果及菌落形态特征,选取菌株进行小型发酵并对发酵液进行乙酸乙酯萃取、旋蒸以制备发酵粗提物甲醇溶液.使用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法进行发酵粗提物对人肺癌细胞株A549及人肝癌细胞株HepG2的抗肿瘤活性研究.结果显示,从广东湛江红树林国家级自然保护区位于雷州沿海地区的3处不同采样点收集的8份根际土壤样品中共分离出154株放线菌,隶属于11个目,15个科,19个属,其中优势菌属为小单孢菌属(Micromonspora)(22.7%,35株);其次是微杆菌属(Microbacterium)(20.8%,32株)及链霉菌属(Streptomyces)(10.4%,16株);有分布于4个属的7株16S rRNA序列相似性低于98.65%,为潜在新种.在发酵粗提物抗肿瘤活性筛选研究中,共53株菌株至少对1株肿瘤细胞株具有抗肿瘤活性,占选取的发酵菌株(67株)的79.1%.研究结果表明,广东湛江雷州沿海地区红树林区域的放线菌多样性高,潜在可开发药用资源丰富.本研究为后续对雷州沿海放线菌分布认知的进一步完善以及抗菌等其他生物活性及相关机制研究的开展提供了充足的菌种基础.
基金项目
广东省普通高校青年创新人才项目(2020KQNCX023)
2018年度广东医科大学科研基金(GDMUM201819)
2020年度广东医科大学科研基金(GDMUM2020002)
2020年度湛江市非资助科技攻关计划(2020B01007)
2020年广东医科大学大学生创新实验项目(ZZZF006)
广东省科技计划(2019B090905011)
南海海洋大健康产业关键技术体系研发与示范项目(ZJW-2019-007)
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