摘要
犬细菌性腹泻作为犬类(Canis lupus familiaris)常见的由病原菌引起的腹泻性疾病,临床常使用抗生素治疗,增加了耐药菌出现的几率.芩连秦皮汤在幼儿细菌性腹泻治疗中具有良好的疗效,本研究拟明确芩连秦皮汤在犬细菌性腹泻中的治疗效果.首先使用半仿生酶提取法提取芩连秦皮汤有效成分,以打孔法检测提取物的体外抑菌效果,利用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测中药提取物的细胞毒性;进一步以大肠杆菌(Escherichia coli)感染犬肠上皮细胞,利用qRT-PCR、Western blot和ELISA方法检测提取物对Toll样受体 4(Toll-like receptor 4,TLR4)、核因子κB(nuclear factor κB,NF-κB)、白细胞介素 1β(interleukin 1β,IL1β)、IL6、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl2)和Bcl2相关蛋白X(Bcl2-associated X,Bax)基因及蛋白水平的影响,使用TUNEL法检测细胞凋亡;最后,使用观察法明确提取物对犬细菌性腹泻的临床治疗效果.体外实验结果显示,中药提取物能够有效抑制大肠杆菌生长,在一定浓度范围和作用时间内无细胞毒性;在大肠杆菌感染的犬肠上皮细胞中,中药提取物能够显著抑制TLR4、NF-κB、IL1β和IL6基因表达,降低TLR4蛋白表达和NF-κB磷酸化水平,减少IL1β和IL6分泌水平;同时降低PCNA蛋白表达和Bcl2/Bax水平,降低细胞凋亡率.在体实验结果显示,中药提取物对犬细菌性腹泻有效,虽然单独治疗的时间长于头孢曲松钠,但是其与头孢曲松钠的中西药联合治疗使止泻时间明显缩短.上述结果提示,中药提取物可能通过抑制炎性因子的表达和分泌来抑制大肠杆菌引发的炎性反应和细胞凋亡,从而发挥对犬细菌性腹泻的治疗作用,并减少临床治疗过程中的抗生素使用.本研究为芩连秦皮汤在犬细菌性腹泻临床治疗中的应用提供基础资料.
基金项目
202甘肃省高等学校创新基金(2022B-378)
甘肃畜牧工程职业技术学院院列科研项目(GMY202109)
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