摘要
细胞色素P450c17(cytochrome P450c17,CYP17A1)是胆固醇合成雄激素途径中的限速酶,在雄激素生物合成中具有关键作用.明确CYP17A1对山羊(Capra hircus)睾酮合成和睾丸发育的影响,对于提高公羊繁殖力具有重要意义.本研究以黔北麻羊为研究对象,构建CYP17A1的RNA干扰载体并转染至睾丸间质细胞,以qRT-PCR和Western blot技术检测CYP17A1基因敲低效果,以CCK-8(Cell Counting Kit-8)检测CYP17A1敲低对睾丸间质细胞增殖的影响;利用qRT-PCR检测增殖相关基因、睾酮合成相关基因以及睾丸发育相关基因的表达水平.结果显示,CYP17A1在各月龄的睾丸和附睾组织中均有表达,其基因敲低效果明显,CYP17A1基因和蛋白表达均极显著下调(P＜0.01),睾丸间质细胞的增殖受到极显著抑制(P＜0.01);CYP17A1基因敲低使间质细胞增殖相关基因增殖细胞核抗原(proliferat-ing cell nuclear antigen,PCNA)和细胞周期蛋白E(cyclin E),睾酮合成相关基因CYP11A1、3β-羟基类固醇脱氢酶1型(3β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1,HSD3B1)、HSD17B3和CYP19A1以及睾丸发育相关基因—类无精症缺失基因(deleted in azoospermia like,DAZL)和胰岛素样生长因子2(insulin like growth factor 2,IGF2)均发生显著的下调表达(P＜0.01).本研究为深入探讨CYP17A1基因对黔北麻羊繁殖性状的影响提供基础资料.
基金项目
贵州省科技支撑计划(黔科合支撑[2021]一般151)
贵州省高层次创新型"百"层次人才项目(黔科合平台人才-GCC[2022]021-1)
贵州省牛羊发展科研项目(QNY20221101)
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