农业生物技术学报2023，Vol.31Issue(12) ：2589-2598.DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2023.12.013

柑橘酵母双杂交文库构建及黄龙病菌SDE34的寄主靶标筛选

Construction of Yeast Two-Hybrid Library and Screening the Host Targets of the Effector SDE34 from Candidatus Liberibacter asiaticus

胡衍铵 曾丽华 李竹 李凤瑶 黄玉林 李瑞民 黄桂艳
农业生物技术学报2023，Vol.31Issue(12) ：2589-2598.DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2023.12.013
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柑橘酵母双杂交文库构建及黄龙病菌SDE34的寄主靶标筛选

Construction of Yeast Two-Hybrid Library and Screening the Host Targets of the Effector SDE34 from Candidatus Liberibacter asiaticus

胡衍铵 1曾丽华 1李竹 1李凤瑶 1黄玉林 1李瑞民 2黄桂艳2
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作者信息

  • 1. 赣南师范大学生命科学学院,赣州 341000
  • 2. 赣南师范大学生命科学学院,赣州 341000;国家脐橙工程技术研究中心,赣州 341000
  • 折叠

摘要

黄龙病是柑橘产业中最具毁灭性的病害,主要由韧皮部杆菌(Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas)引发,其致病机理尚不清楚.Sec依赖型效应蛋白(sec-dependent effectors,SDE34)(CLIBASIA_04055)是黄龙病菌的核心SDE效应蛋白之一,为了筛选黄龙病菌SDE34在柑橘中的寄主靶标,本研究以感染黄龙病的纽荷尔脐橙(Citrus sinensis)叶片为材料构建酵母双杂交(yeast two hybrid,Y2H)cDNA文库,通过Y2H技术筛选与SDE34互作的柑橘蛋白,并利用双分子荧光互补技术(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)对其互作进行验证.结果表明,本研究构建的酵母双杂交cDNA文库滴度为2.3×108 CFU/mL,插入片段长度为300～2 000 bp.通过Y2H筛选到3个柑橘蛋白与SDE34互作,其中重金属相关的异戊二烯化植物蛋白(heavy metal-associated isoprenylated plant protein,HIPP7)的筛选频率高达83.33%,BiFC结果表明,HIPP7与SDE34在植物细胞中互作.亚细胞定位结果表明,HIPP7在植物细胞质和细胞核中均有分布.实时荧光定量PCR分析发现,感染黄龙病后,HIPP7基因极其显著下调表达(P＜0.001).HIPP7同源基因在多种植物-病原菌互作体系中作为感病基因发挥功能,提示SDE34可能通过靶向柑橘感病基因HIPP7促进黄龙病菌侵染.本研究为解析黄龙病的致病机理以及柑橘抗病育种提供理论依据.

关键词

黄龙病/Sec依赖型效应蛋白(SDE)/酵母双杂交文库/蛋白互作/感病基因

Key words

Huanglongbing(HLB)/Sec-dependent effector(SDE)/Yeast two-hybrid library/Protein interaction/Susceptibility gene

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基金项目

江西省"双千计划"创新领军人才短期项目(jxsq2020102129)

江西省自然科学基金(20202BABL215006)

国家级大学生创新创业训练计划(202110418008)

校级大学生创新创业训练计划(CX220066)

出版年

2023
农业生物技术学报
中国农业大学 中国农业生物技术学会

农业生物技术学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.801
ISSN：1674-7968
参考文献量1
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