农业生物技术学报2023，Vol.31Issue(12) ：2665-2673.DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2023.12.020

弓形虫半巢式PCR实时荧光检测方法的建立

Development of a New Semi-nested PCR Real-time Fluorescence Technology for Detection of Toxoplasma gondii

陈梦陶 朱龙佼 刘海燕 许文涛
农业生物技术学报2023，Vol.31Issue(12) ：2665-2673.DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2023.12.020
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弓形虫半巢式PCR实时荧光检测方法的建立

Development of a New Semi-nested PCR Real-time Fluorescence Technology for Detection of Toxoplasma gondii

陈梦陶 1朱龙佼 2刘海燕 3许文涛2
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作者信息

  • 1. 华北理工大学公共卫生学院,唐山 063210
  • 2. 中国农业大学营养与健康系/食品精准营养与质量控制教育部重点实验室,北京 100083;中国农业大学食品科学与营养工程学院转基因生物安全性评价(食品安全)重点实验室/食品质量与安全北京实验室,北京 100083
  • 3. 天津体育学院运动营养与健康组学研究中心,天津 301617
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摘要

弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种全世界分布的人畜共患寄生虫,在猪(Sus scrofa)和小型家畜中的慢性感染率较高,能够经食源性传播感染人类,对免疫功能较弱的个体会造成极大的危害.本研究根据GenBank公布的弓形虫529 bp基因序列(DQ779191.1)设计了一组特异性引物,基于SYBR GreenⅠ染料建立了半巢式PCR实时荧光法对弓形虫进行检测.第一轮扩增利用外引物扩增弓形虫529 bp重复序列,第二轮则结合SYBR GreenⅠ染料利用内引物对529 bp基因片段进行实时荧光扩增,其最终产物片段长度为260 bp.在优化后的最佳反应条件下,该方法的检测限为18.4 fg/μL,灵敏度较高;与细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)、猪肉绦虫(Taenia solium)基因组均无交叉反应,特异性较强.因此,本研究成功建立了灵敏度高、特异性强的半巢式PCR实时荧光检测方法,为监测家畜及肉类食品中弓形虫感染情况提供了有效的技术手段.

关键词

半巢式PCR/SYBR/GreenⅠ染料/弓形虫/实时荧光检测

Key words

Semi-nested PCR/SYBR Green Ⅰ dye/Toxoplasma gondii/Real-time fluorescence detection

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基金项目

国家重点研发计划(2022YFF0607900)

北京市科技计划(Z221100007122004)

北京市景观休闲农业创新团队项目(BAIC09-2023)

河北省重点研发计划(21372801D)

青年人才托举工程项目(BYESS2022133)

出版年

2023
农业生物技术学报
中国农业大学 中国农业生物技术学会

农业生物技术学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.801
ISSN：1674-7968
参考文献量4
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