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p53-EGFP表达载体的构建及其对A549的影响

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构建具有EGFP标签的抑癌基因p53表达载体,并验证其对肺癌细胞A549的影响.以质粒pcDNA3.1-p53为模板,设计引物并进行PCR扩增获得目的基因p53,将获得的目的基因克隆至载体pcDNA3.1-EGFP上,用琼脂糖凝胶电泳检测目的条带,双酶切以及测序验证.将克隆好的载体,利用脂质体法转染A549细胞,荧光显微镜下观察,同时用MTT法测不同时间段细胞OD值.结果表明,琼脂糖凝胶电泳结果显示,目的基因扩增成功.双酶切及DNA测序结果均证实,成功构建了载体pcDNA3.1-EGFP-p53.转染A549细胞后,荧光显微镜下观察到绿色荧光.MTT法测定结果表明,目的基因转染的A549细胞组所测得的OD值明显低于对照组(p<0.01).因此,具有EGFP标签的抑癌基因p53表达载体pcDNA3.1-EGFP-p53构建成功,转染A549细胞后,对A549细胞具有一定抑制作用.为后续继续研究p53-MDM2生物发光能量共振转移作用奠定了基础.
Construction of p53-EGFP Expression Vector and Its Inhibitory Effect on Lung Cancer Cell A549

胡昌亮、尹志刚、俸婷婷、周英

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贵州大学 生命科学学院,贵州 贵阳 550025

贵州省药食同源植物资源开发工程技术研究中心,贵州 贵阳 550025

贵州省药食两用资源应用开发工程实验室,贵州 贵阳 550025

贵阳中医学院药学院,贵州 贵阳 550002

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EGFP 抑癌基因 p53 表达载体 A549细胞

国家自然科学基金地区基金贵州省科技计划社会攻关计划项目贵州省科技重大专项子课题贵州省高层次创新型人才培养贵州省药食同源植物资源开发工程技术研究中心

81660576黔科合[2016]支撑2909黔科合J重大字[2015]2002-3-4黔科合人才20154032号黔科合G字20154001号

2019

山地农业生物学报
贵州大学

山地农业生物学报

CSTPCD
影响因子：0.486
ISSN：1008-0457
年,卷(期)：2019.38(1)
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